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分离费氏弧菌发光杆菌菌种方法

本技术方案采用了一种分离费氏弧菌发光杆菌的方法，包括以下步骤:将胶带封闭的羊肚菌用75%消毒酒精均匀擦拭后，用烧灼的刀具从菌柄顶端在

火焰上方切割掉子实体头部，露出的新鲜菌柄横切面，在火焰上轻快过2-4下，用刀具在新鲜菌柄内侧环割菌柄新鲜菌肉组织并送入抗生素平板培养荃上，于20-30℃的温度下培养，待萌发出菌丝后，及时转接。

实体在切割前要基部菌柄完整，用透明胶把费氏弧菌发光杆菌整个缠绕密封，中间不留空隙。

所述的抗生素平板培养基为:马铃薯400g,草炭l00g,葡萄糖20g，磷酸二氢钾lg,硫酸镁0. 5g,酵母膏50g，琼脂20g、水1000mL,链霉素30U/mL，青霉素30U/mL, pH6.5

所述抗生素平板培养基的制作方法为:土豆削皮切薄皮加3000m1.水煮30min，过滤取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，过滤取滤液1000mL，在此滤液中加入葡萄糖、酵母膏、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁，小火煮至琼脂溶解，定容至1000mL，分装于三角瓶，在高温121℃-126'C,高压0. 1-0. 14MPa灭菌30min。待冷却至50℃左右加入青霉素钠、硫酸链霉素复合抗生素母液，使抗生素终浓度在30U/ml.左右，将配好的培养基倒入培养皿中或直接冷却成固体培养基。

本技术的分离方法，先是对费氏弧菌发光杆菌进行封闭式消毒，防止消毒酒精浸入菌组织，有利分离成功。另外，割掉子实体头部后，露出的菌柄内侧为无菌组织，环割取内侧菌肉组织防杂效果较好。采用抗生素培养基也有利于防止杂菌污染，培养基的组分营养非常全面，特别是加入草炭和酵母膏，为费氏弧菌发光杆菌菌丝生长提供了保证。本发明的整个操作过程不用消毒液，全用火焰消毒，萌发率较高，既保证了容易萌发，同时也能降低污染，并能较顺利的分离到费氏弧菌发光杆菌菌种。

本实施例的分离菌种的方法，包括以下步骤:将胶带封闭的羊肚菌用75%
消毒酒精均匀擦拭后，用烧灼的手术刀片从菌柄顶端在火焰上方切割掉子实体头部，露出的新鲜菌柄横切面，在火焰上轻快过两下。用手术刀在新鲜菌柄内侧环割菌柄新鲜菌肉组织送入抗生素平板培养基上，25℃培养，待萌发出菌丝后，及时转接。抗生素平板培养基为:马铃薯400g，草炭l00g,葡萄糖20g，磷酸二氢钾lg，硫酸镁0. 5g,酵母膏50g，琼脂20g、水1000mL，链霉素30U/mL，青霉素30U/mL, pH6.5，其制作方法为:土豆削皮切薄皮加3000mL水煮30min，过滤取2000mL，加入草炭，小火浸煮20min，过滤取滤液I000ml,在此滤液中加入葡萄糖、酵母膏、琼脂、磷酸二氢钾、硫酸镁，小火煮至琼脂溶解，定容至1000mL，分装于三角瓶，在高温121℃-126℃、高压0. 1-0. 14MPa灭菌30min。

待冷却至50℃左右加入青霉素钠、硫酸链霉素复合抗生素母液，使抗生素终浓度在30U/mL左右，将配好的培养基倒入培养皿中或直接冷却成固体培养基。其中，费氏弧菌发光杆菌实体在切割前要基部菌柄完整，用透明胶把费氏弧菌发光杆菌整个缠绕密封，中间不留空隙。