技术文章/ARTICLES

亮发光杆菌菌种如何证明进行了传代
1.菌种是从事微生物学及生命科学研究的基本材料，在医学领域中，诊断制品的制备，菌苗的、微生物致病性研究，药物的抑菌试验及药品微生物检验等都有一套完整的菌种.微生物具有生命活力，在传代过程中易发生变异甚至死亡，因此菌种传代与保藏是一项重要的基础工作。
2.把冻干菌种管、灭菌1ml滴管、双碟、镊子、营养肉汤培养基、营养琼脂斜面数支，移入接种室或净化工作台。
3.先用砂轮将冻干菌种安瓶颈部挫出刻痕,再将冻干菌种管外壁用75%乙醇擦洗消毒、稍干，用75%乙醇棉擦净，放在灭菌双碟内，待干。点燃酒精灯，将菌种管的封口一端在火焰上，烧灼红热，滴在灼热的菌种管封口一端，使骤冷而炸裂。
4.取灭菌镊子，在火焰旁，将炸裂的管口打开，放入灭菌双碟内，另取1支灭菌滴管，在火焰旁吸取营养肉汤少许，加至菌种管底部，将冻干菌搅动促使溶解，随即吸出管内菌液，分别接种至营养琼脂斜面及普通肉汤内，并将滴管及菌种管投入消毒液内，将已接种的营养肉汤及营养琼脂斜面进行培养。
5.点燃酒精灯，用左手握住菌种斜面，将管口靠进火焰旁，右手拿接种棒后端，将接种环烧红30秒，随后将全部接种棒金属部分在火焰上烧灼，往返通过3次。左手将管口在火焰上旋转烧灼，右手用无名指、小指及掌部夹住棉塞，拨开棉塞，将接种环伸人管内先在近壁的琼脂斜面上靠一下，稍冷却再移至菌苔上，刮去少量菌苔，随即取出接种棒，并将菌种管口移至火焰旁。
6.堵上棉塞，左手将菌种管放下，取营养琼脂斜面1支，照上述操作打开棉塞，将接种环伸入管内至琼脂斜面的低部，由底向上，将接种环轻贴斜面的表面曲折移动，使细菌划在斜面的表面上。

7.菌种斜面传代操作
8.培养基应新鲜制备，如斜面已无冷凝水者，不宜再使用。标签上注明菌种名及菌种编号。至冰箱取出的菌种斜面，应在室温放置约30分钟，待温度平衡后再移入接种室或超净工作台。
9.取出接种棒，在火焰旁将培养基管棉塞堵上，然后将接种过细菌的接种棒在火焰上烧灼灭菌。
10.菌种的培养与保存
11.大肠杆菌35~37℃培养48小时
金黄色葡萄球菌30~35℃培养48小时枯草芽孢杆菌30~35℃培养48小时白色念珠菌23~28℃培养7天黑曲霉23~28℃培养7天
12.将培养物管自培养箱取出后放人冰箱(2-8℃)保存，一般884个月转种一次。4.5菌液的制备
13.取上述培养好的营养肉汤菌悬液(浓菌液)1ml，加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液混匀，为10-1，再取另一只刻度吸管吸取10-1菌液1ml加到9ml0.9%无菌氯化钠溶液混匀，为10-2……以此类推，稀释至含活菌数在50~5301个。用平板计数。

14.取上述培养好的菌种斜面移入接种室或净化工作台，放置室温后,用接种环取菌苔少许接种置营养肉汤中(10ml/支,已灭菌),将已接种毕的细菌管置35℃~37℃培养18~24小时，取出备用。一般于冰箱中保存可用两周。
15.此稀释菌液用于试验后加阳性对照，可在一周内使用。
16.传代和接种使用后，应做好《菌种传代接种记录》。