胰岛素elisa检测试剂盒采用双抗体夹心法检测猪圆环II型病毒CAP蛋白抗原。其基本原理如下:用一株特异性单克隆抗体制备包被微孔板,另外一株特异性单克隆抗体制备HRP酶标记物。当标本中含有相应的抗原时,会形成抗体-抗原-抗体-酶的复合物。未结合的物质通过洗涤去除。加入显色底物显色,通过测量颜色的变化来判断标本中抗原的浓度。
胰岛素elisa检测试剂盒的试剂准备:
1). 测试前将试剂盒组份置于室温(18-25℃)平衡30分钟,测试后应立即放回2-8℃保存。
2). 洗涤液:将25ml浓缩洗涤液倒入475ml的蒸馏水中,混匀即可。
3). 病料处理方法:称病料1克,加入1-2毫升的样品稀释液,再用5-10克的石英砂研磨充分(5-10分钟),静置3小时,3000转离心10-15分钟,取上清用于检测。
注2:需用试剂盒提供的样品稀释液,不得使用PBS等缓冲液。
4). 油性疫苗:取1毫升油性疫苗,然后加入0.1毫升的分析纯正戊醇,充分震荡1分钟,将该瓶溶液放入2-8度冰箱,静置30分钟,可见油、水分离。用吸管或是移液器吸出下层水相用于检测。水性佐剂的疫苗可直接检测,必要时需要用试剂盒配套的稀释液稀释。
注3:如需稀释,请用胰岛素elisa检测试剂盒提供的样品稀释液,不得使用PBS等缓冲液。
5). 如需定量检测,建议对标本用试剂盒中的样品稀释液进行系列稀释,以便计算平均值。此时需用标准品制备标准曲线,可选择3-5份测值近似的样品(比如蔗糖密度梯度离心法定值样品)等比例混合后以理论浓度作为标准品浓度使用。