进行各项实验条件的选择包括:
(1)固相载体的选择:不管何种载体,在使用前均可进行筛选,用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否良好。
(2)酶标记抗体工作浓度的选择:首先用直接ELISA法进行初步效价的滴定(见酶标记抗体部份),然后再固定其它条件或采取“方阵法”(包被物、待检样品的参考品及酶标记抗体分别为不同的稀释度)在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
(3)ELISA试剂盒包被抗体(或抗原)的选择:将抗体(或抗原)吸附在固相载体表面时,要求纯度要好,吸附时一般要求PH在9.0~9.6之间,吸附温度,时间及其蛋白量也有一定影响,一般多采用4℃18~24小时。
一、准确性:标准品线性回归与预期浓度相关系数R值,大于等于0.9900。
二、灵敏度:zui低检测浓度小于1.0 ng/mL。
三、特异性:不与其它可溶性结构类似物交叉反应。
四、重复性:板内、板间变异系数均小于15%。
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