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    感觉态细胞的制备和注意事项

    点击次数:6117  更新时间:2020-05-20
       经过一系列处理后,变为易于吸收外源DNA的状态,称为感觉态细胞
      表面正电荷增加,膜和壁的通透性增加,能够非选择性的吸附并摄取外源DNA。
      同时,由于感受态细胞结构不完整,敏感性增加,过于激烈的操作会使其破裂,因此操作时应注意动作轻柔。
     
      感觉态细胞在基因工程实验中,经常要使用各种细胞进行DNA的转化操作。转化指同源、异源的“裸露”的DNA分子被细胞摄取并得到表达的基因水平转移过程。制备是分子生物学研究中的一个重要环节,其制备质量的好坏直接影响到后续实验工作的进行。
     
      注意事项:
      1.制作时应使用的玻璃器皿或塑料容器。洗刷这些玻璃器皿或塑料容器时应尽量洗净。由于微量的洗涤剂或污染物都可能降低细胞的转化效率,因此在洗刷完用于制作细胞的玻璃器皿或塑料容器后,用去离子水浸泡一晚,然后再充分洗净。
     
      2.制作时使用的菌种,不应使用4℃或常温保存的传代细菌。应使用-70℃保存的菌种,在LB抗生素平板培养基上分级划线培养后,挑取单菌落。使用这种菌种制作的感觉态细胞,能提高转化效率。
     
      3.菌体的浓度是影响感受态效率高低的主要因素,适于本法的菌体浓度应在OD600值0.05-0.11之间。
     
      4.用于制备的菌体培养停止后要立即处理,不要将培养液过长时间室温放置,在冰中放置时也不要时间过长。
     
      5.制备操作过程中,离心后弃上清时要尽量弃尽,否则会降低转化效率。
     
      6.主要的转化操作都是无菌操作,并且在冰上进行。
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