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    田鼠分枝杆菌探针法荧光PCR检测试剂盒质量检测

    点击次数:679  更新时间:2021-02-02

    质量检测:
    1)紫外吸收法测定
    先用稀释用的TE溶液将分光光度计调零。然后取少量RNA溶液用TE稀释(1:100)后,读取其在分光光度计260nm和280nm处的吸收值,测定RNA溶液 浓度和纯度。
    浓度测定
    A260下读值为1表示40 g RNA/ml。样品RNA浓度(g/ml)计算公式为:A260 ×稀释倍数× 40 g/ml。具体计算如下:
    RNA溶于40 l DEPC水中,取5ul,1:100稀释至495的TE中,测得A260 = 0.21
    RNA 浓度= 0.21 ×100 ×40 g/ml = 840 g/ml 或 0.84 g
    取5ul用来测量以后,剩余样品RNA为35 l,剩余RNA总量为:
    35 l × 0.84 gl = 29.4 g
    ②纯度检测
    RNA溶液的A260/A280的比值即为RNA纯度,比值范围1.8到2.1。
    2)变性琼脂糖凝胶电泳测定
    ①制胶
    1g琼脂糖溶于72ml水中,冷却至60℃,10 ml的10× MOPS电泳缓冲液和18 ml的37% 甲醛溶液(12.3 M)。
    10×MOPS电泳缓冲液
    浓度 成分
    0.4M MOPS,pH 7.0
    0.1M 乙酸钠
    0.01M EDTA
    灌制凝胶板,预留加样孔至少可以加入25 l溶液。胶凝后取下梳子,将凝胶板放入电泳槽内,加足量的1×MOPS电泳缓冲液至覆盖胶面几个毫米。

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