实验反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC随机分布,避免7325个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
绵羊白介素2(IL-2)elisa试剂盒
绵羊主要组织相容性复合体(MHC)elisa试剂盒
绵羊白介素6(IL-6)elisa试剂盒
绵羊白介素1β(IL-1β)elisa试剂盒
绵羊白介素1(IL-1)elisa试剂盒
绵羊补体片段3b受体(C3bR)elisa试剂盒
绵羊白介素2受体(IL-2R)elisa试剂盒
猴白介素4(IL-4)elisa试剂盒
猴白介素2(IL-2)elisa试剂盒
猴Ⅳ型胶原(Col Ⅳ)elisa试剂盒
猴Ⅲ型前胶原肽(PⅢNP)elisa试剂盒
猴透明质酸(HA)elisa试剂盒
猴β2微球蛋白(BMG/β2-MG)elisa试剂盒
猴B病毒(BV)elisa试剂盒
猴载脂蛋白B100(apo-B100)elisa试剂盒
猴载脂蛋白A1(apo-A1)elisa试剂盒
猴白介素6(IL-6)elisa试剂盒
猴γ干扰素(IFN-γ)elisa试剂盒
猴胰岛素(INS)elisa试剂盒
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