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    停乳链球菌PCR检测试剂盒操作方法

    点击次数:638  更新时间:2021-05-19

    操作方法:
    一、样品 RNA 的制备
    1、用自选方法抽提病毒样品 RNA。注意:可以选用本公司的一管式病毒 RNAout
    2、或柱式病毒 RNAout。
    二:RT(逆转录)反应合成 cDNA
    1. 按下表配制 RT 反应体系(20 μL 体系)
    2. 70℃保温 5 分钟变性模板后立即冰浴。
    3. 严格按顺序加入 6μL RT Buffer(含 dNTP)和 2μL MMLV 逆转录酶(含 RI),
    反应终体积为 20μL。
    4. 42℃保温 60 分钟。此步为 RT 反应。
    5. 70℃保温 10 分钟以终止反应,然后放置在冰上待用。合成的 cDNA 可以直接作为 PCR 模板使用,丌需要纯化。

    停乳链球菌PCR检测试剂盒检测程序:
    1.  加样:每孔各加入标准品或待测样品 100ul ,将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
    2.  洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。
    3.  每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
    4.  洗板:同前。
    5.  每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
    6.  洗板:同前。
    7.  每孔加入底物工作液100ul ,置 37   ℃ 暗处反应15 分钟。
    8.  每孔加入100ul 终止液混匀。
    9.  30分钟内用酶标仪在 45 0 nm 处测 吸光值。

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