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    实时荧光PCR试剂盒使用及效果

    点击次数:398  更新时间:2023-03-13

    使用及效果:

    PCR反应特点

    () 特异性强

    PCR反应的特异性决定因素为:

    ①引物与模板DNA特异正确的结合;

    ②碱基配对原则;

    ③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;

    ④靶基因的特异性与保守性。

    其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及Taq DNA聚合酶耐高温性,使反应中模板与引物的结合(复性)可以在较高的温度下进行,结合的特异性大大增加,被扩增的靶基因片段也就能保持很高的正确度。再通过选择特异性和保守性高的靶基因区,其特异性程度就更高。

    (2) 灵敏度高

    PCR产物的生成量是以指数方式增加的,能将皮克(pg=0-2g)量级的起始待测模板扩增到微克(ug=0-6g)水平。能从00万个细胞中检出一个靶细胞;在病毒的检测中,PCR的灵敏度可达4504个RFU(空斑形成单位);在细菌学中zui小检出率为4504个细菌。

    (3) 简便、快速

    PCR反应用耐高温的Taq DNA聚合酶,一次性地将反应液加好后,即在DNA扩增液和水浴锅上进行变性-退火-延伸反应,一般在2~4 小时完成扩增反应。扩增产物一般用电泳分析,不一定要用同位素,无放射性污染、易推广。

    (4) 对标本的纯度要求低

    不需要分离病毒或细菌及培养细胞,DNA 粗制品及总RNA均可作为扩增模板。可直接用临床标本如血液、体腔液、洗嗽液、毛发、细胞、活PCR技术概论。


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