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    人心肌细胞鉴定试剂盒细胞培养方法

    点击次数:418  更新时间:2023-05-25

    细胞培养方法;

    1、细胞传代:细胞密度达到80-90%时即可传代

    ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次;

    ②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆盖整个瓶或皿,盖好放入培养箱消化;

    ③1-2min后,显微镜下观察细胞,若大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;若细胞还是贴壁,放回培养箱继续消化至可以轻轻吹打下为止;

    ④将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清;

    ⑤用新鲜培养基重悬后加入培养瓶或皿中,T25培养瓶加6-8ml培养基;

    ⑥悬浮细胞直接离心收集,细胞沉淀重悬后分到新培养瓶中。

    2、细胞复苏:

    ①将冻存管在37℃温水中快速摇晃融化,时间1min左右,加入4-5ml培养基混匀。

    ②在1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1-2ml培养基吹匀,将细胞悬液加入培养瓶中,补加适量培养基。

    3、细胞冻存:待细胞生长状态良好时进行细胞冻存保种

    ①弃去培养上清,用PBS或生理盐水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)

    ②1-2min后,显微镜下观察细胞,大部分细胞回缩且有少量细胞脱落,轻轻吹打下确认消化情况后加入*培养基终止消化;

    ③将细胞悬液1000RPM左右条件下离心4min,弃上清,加1ml冻存液重悬细胞;

    ④将冻存管放入程序降温盒,放入-80℃冰箱,4小时后将冻存管转入液氮罐储存。

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