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    ADH测定操作

    点击次数:510  更新时间:2023-08-17
    3磷酸甘油醛脱氢酶(GAPDH)生化检测试剂盒是糖酵解途径的关键酶,与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关。
    测定意义:
    GAPDH催化3-磷酸甘油醛氧化生成1,3-二磷酸甘油酸,是糖酵解途径的关键酶,与糖异生途径、体内血糖浓度的维持和糖尿病的发生密切相关,在机体糖、脂、蛋白代谢紊乱疾病中发挥重要作用。
    测定原理:
    3-磷酸甘油酸激酶催化三磷酸甘油酸和ATP生成1,3二磷酸甘油酸。GAPDH逆向催化1,3二磷酸甘油酸和NADH生成3磷酸甘油醛、无机磷和NAD,340nm处测定NADH的减少量可反映GADPH活性的高低。
    需自备的仪器和用品:
    分光光度计/酶标仪、恒温水浴锅、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研钵、冰和蒸馏水。粗酶液提取:
    1、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。
    2、细菌、真菌:按照细胞数量(09个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);16000g, 4℃离心20min,取上清液置冰上待测。
    3、血清等液体:直接测定。
    ADH测定操作: 
    1. 分光光度计预热30min,调节波长到340nm,蒸馏水调零。
    2. 试剂三在25℃水浴中保温30min。
    3. 在1mL石英比色皿中依次加入100μL样本上清液、800μL试剂三和100μL试剂四,迅速混匀后于340nm测定吸光值变化,分别记录15s和75s时吸光值,分别记为A1和A2。△A测定管=A1-A2。
     
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