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实验步骤

1.标本的采取和保存

可用作 ELISA测定的标本十分广泛体液(如血清)、分泌物(唾液)和排池物(如尿液、業便)等均可作标本以测定其中某种抗体或抗原成

有些标本可直接进行测走(如血清、尿液),有些则需经预处理(如龚便和某些分泌物)。大部分 ELISA检测均以血清为标本。血浆中除尚含有

除特殊情况外,在医学检验中均以血清作为检测标本。在 ELISA中血浆和血清可

血清标本可按常规方法采集应注意避兔溶血

细胞溶解时会释放出具有过氧化物酶活性的物质以HRP为标记的 ELISA;测定中,溶血标本可能会增加非特异性显色。

2.试的淮备:

按试剂盒说明书的要求注备实验中需用的试剂。 ELISA中用的蒸馏水或去离子水包括用于洗涤的应为新鲜的和高质量的。自配的中液

应用pH计测量较正。从冰箱中取出的试验用试剤应待温度与室温平衡后使用。试剤盒中本次试验不需用的部分应及时放回冰箱保存

在 ELISA中一般有3次加样步聚,即加标本,加加酶结合物加底物。加样时应将所加物加在 LEISA板孔的底部避兔加在孔壁上

出不可产生气泡。加标本一般用微量加样器按规定的量加入板孔中。毎次加标本应更换吸嘴以兔发生交叉污染也可用一次性的定量塑

料管加加样。有此测定(如司接法EISA)需用稀释的血清,可在试管中按规定的稀释度稀释后再加样。也可在板孔中加入稀释液再在其中加入

血清标本然后在微型震荡器上震荡1分钟以保证混和。加酶结合物应用液和底物应用液时可用定量多道加液器使加液过程迅速完成。

4:呆温:

在 ELISAI中一般有两次抗原抗体反应即加标本和加加结合物后。抗原抗体反应的完成需要有一定的温度和时间这一保温过程称为温育(i

ulation),有人称之为孵育,在 ELISA中似不恰当。 ELISA固相兔疫测定抗原、抗体的结合只在国相表面上发生。以抗体包被的夹心法为逐步平衡的过程因此需经扩散才能达到反应的终点。在其后加入的毎标记抗体与同相抗原的结合也同样如此。这就是为什么 ELISA反应

总是需要一定时间的温育。

5.洗淙:

洗涤在 ELISA过程中虽不是一个反应步張但却也决定着实验的成败。 ELISA是靠洗涤来达到分离游离的和姞合的标记物的目的。通过洗

以清除残留在板孔中没能与固相抗原或抗体结合的物质以及在反应过程中非特异性地吸附于固相。

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