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    制备单克隆抗体时有哪些具体步骤

    点击次数:521  更新时间:2023-12-19
    一抗可用于检测糖尿病、癌症、阿尔茨海默病和帕金森病的生物标志物。二抗则主要用于检测和纯化抗原蛋白。二抗在标记和检测方面比较灵敏和灵活。所以,它们在流式细胞术、蛋白质印迹和细胞成像等一系列应用中用于一抗的比色、化学发光和荧光检测。二抗类型的选择基于一抗的类别:免疫球蛋白IgG或IgM、标签类型和来源宿主。
    制备单克隆抗体时有哪些具体步骤:
    一、免疫动物选择
    根据需要产生目标抗原的免疫反应,选择合适的免疫动物。例如,小鼠是免疫动物之一,因其易于操作且在免疫应答方面较为强大。
    二、抗原免疫
    将目标抗原注射到免疫动物体内,通常需要多次免疫以激发免疫反应。可以选择不同的免疫路线,如皮下、腹腔、静脉等。
    三、细胞融合
    从免疫动物获得脾细胞或淋巴细胞,与骨髓瘤细胞或其他癌细胞(如SP2/0、NS0等)融合,形成杂交瘤细胞。融合细胞通常使用(PEG)或电穿孔等方法促进细胞融合。
    四、杂交瘤细胞筛选
    对融合细胞进行筛选,一般使用HAT选择性培养基,通过对非杂交瘤细胞和单克隆杂交瘤细胞的抗代选择,筛选出产生目标抗体的单克隆杂交瘤细胞。
    五、单克隆抗体生产
    从筛选出的单克隆杂交瘤细胞中获取单一细胞系,并进行大规模培养和产生抗体。一般可采用体外或体内方式。
     
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