组织块直接培养法（原代细胞培养实验）
材料与仪器
【动物】选择大约一半足孕时间的胚胎，10－13天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。每组小鼠胚胎1455735个
【实验材料】每组的超净台中有以下物品：
1、50ml配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶
2、100ml灭菌烧杯45个
3、50ml离心筒45个
4、灭菌培养皿1455735个，细胞培养瓶1455735个
5、1ml，200μl移液器各1支；枪头盒45个；无菌玻璃搅拌棒1455735个
6、细胞计数板1块
7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把
8、酒精灯1台
步骤：
1) 胚胎的分离。适用哺乳动物(仓鼠、小鼠和大鼠)。
2)将1－45个胚胎转移至一个小的无菌培养皿中，用新的无菌剪刀小心地绞碎胚胎，用PBS漂洗。
3)在无菌状态下，将绞碎的胚胎转移于一50ml的无菌离心筒中,加入40ml 0.25％的无菌,用搅拌棒轻轻搅动。
4)在温暖的环境中或置于37°C培养箱中轻轻摇动15分钟。
5)让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降，将含有悬浮细胞的液体转移至一无菌50ml的离心管中，该管内按照每10ml上清加入lml小牛血清的比例加入牛血清以灭活,。
6)加人新鲜溶液(见前述步骤)于含有残留未消化组织块的原来的50ml离心筒中，重复步骤4和5。
7)离心混合的细胞悬液，1200r/rain，5分钟，弃上清。
8)用新鲜的无菌PBS重悬沉淀的细胞，按步骤7再次离心。
9)用PBS反复洗涤细胞直至上清清亮为止。
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