操作说明:
1)对于常温运输的细胞,收到细胞后,检查是否有运输问题,即细胞培养瓶或管是否破损,细胞培养液是否溢出。若没有运输问题,请75%酒精消毒后,保留封口膜,放入细胞培养箱中静置。严格检查培养箱的参数:温度,湿度和CO2浓度。细胞静置时间一般为6-12小时后,细胞状态稳定后,即可开始后续操作。选用正确的细胞培养体系,A2780(人卵巢癌细胞)严格按照说明书的培养条件进行培养。条件允许,培养的前三天内做细胞拍照记录,通过邮件发送给我们做及时状态跟踪。
2)对于干冰运输的细胞,请取出冷冻管后,须立即放入37C水槽中快速解冻,轻摇冷冻管使其在1分钟内全部融化,并注意水面不可超过冷冻管盖沿,否则易发生污染情形。然后将其复苏培养,次日更换培养液。
3) 在细胞复苏及培养过程中,务必保持无菌操作环境,使用前对超净工作台进行紫外灯照射消毒至少30分钟,并穿戴好实验服、手套及口罩。复苏后的细胞需用新鲜预热的培养基轻轻吹打均匀,避免产生气泡,随后接种至已预热的培养皿或培养瓶中,细胞密度控制在适宜范围内,以保证良好的生长状态。
4) 定期检查细胞生长情况,包括形态学观察、贴壁情况及培养基颜色变化。若培养基变黄或细胞密度过高,应及时更换新鲜培养基或进行传代培养。传代时,采用适当的胰酶消化时间,避免过度消化导致细胞损伤,同时控制传代比例,维持细胞活力。
5) 在进行任何药物处理、基因编辑或细胞功能实验前,建议设立对照组,以准确评估实验效果。对照组细胞应与实验组细胞在相同条件下培养,仅不施加实验因素。此外,记录实验过程中的关键步骤、时间点和观察结果,为后续数据分析提供可靠依据。
6) 考虑到细胞培养的长期性和稳定性,建议定期冻存细胞,以保留细胞株的遗传特性和生物学功能。冻存前,选择生长状态良好的细胞,按照标准冻存程序进行,确保细胞在液氮中长期保存后的复苏率和活性。
7) 最后,所有细胞培养相关的废弃物,包括培养基、废液、使用过的耗材等,均需按照实验室生物安全规定进行处理,防止交叉污染和潜在的环境风险。通过严格遵守上述操作说明,可以确保SK-MES-07人肺鳞癌细胞培养的成功率和实验结果的可靠性。
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