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    大鼠胰岛细胞培养实验原理

    点击次数:1076  更新时间:2015-04-28

     实验方法原理 
    水合氯醛腹腔麻醉,采用胶原酶ⅴ逆行灌注、原位消化及Ficoll-400梯度离心的方法分离、纯化胰岛,并分离、培养胰岛单细胞。

    1. 用无菌D-Hanks’液将组织块清洗 2~3 次,加入新鲜酶液继续消化,重复上述步骤,此时组织块边缘模糊。
    2. 将组织块浸入消化酶液中,38℃±1℃消化10 分钟,将消化酶液与组织块分开,组织块重新加入新鲜消化酶液进行消化;而原消化酶液1500  rpm离心 10 分钟,取沉淀即为消化下的细胞,重新用无菌D-Hanks’悬浮,离心,重复 1~2 次,再用培养基洗 2~3 次,用培养基悬浮即得细胞悬液。
    3. 将消化过的组织块重复消化5~6 次至组织块消化*,重复以上操作。
    4. 合并几次所得细胞悬液,计数,大鼠调整细胞浓度为 2×48个细胞/mL,将细胞悬液接种于24 孔塑料培养板中,每孔1 mL,置于37℃,5%CO2,饱和湿度培养箱中培养。
    5. 由于成纤维细胞贴壁要比胰岛细胞迅速,接种15 h 后,轻轻振荡培养板,将上面未贴壁的细胞接入新的培养板中,可除去部分成纤维细胞。

    0.2g 薯莨 TLC法鉴别 121295-0301
    3.0g 蒺藜 TLC法鉴别 121296-200703
    2.0g 石吊兰 TLC法鉴别 121297-
    1.0g 隔山消 TLC法鉴别 121298-200402
    0.5g 大果木姜子 TLC法鉴别 121300-0301
    5.0g 羊奶奶叶 TLC法鉴别 121301-
    1.0g 见血飞 TLC法鉴别 121302-200301
    1.0g 甘草(胀果甘草) TLC法鉴别 121303-200502
    大鼠1g 莪术(温郁金) TLC法鉴别 121304-
    2.0g 结石草 TLC法鉴别 121305-200301
    0.5g 紫色姜 TLC法鉴别 121306-200301

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