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    首页   >    技术文章   >   ELISA试剂样本的实验准备

    ELISA试剂样本的实验准备

    点击次数:1092  更新时间:2015-05-06

    前期准备

            利用进行临床检验常见的样本一般包括血液(指

    血,静脉血),尿,粪便,脑脊液,胸腹水,前列腺液,精液

    ,阴道分泌物等,这些样本收集的时间、方法和保存都有一定

    的要求。

    样本实验准备
    在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成

    份是否足够稳定。对收集后当天就进行
    检测的样本,ELISA试剂盒及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本,及

    时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,-70℃冻存备用。

    标本应避免反复冻融。
        液体类标本:  包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、

    细胞培养上清等。
    1. 血清:
    室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000

    转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离

    心。
    2. 血浆:
    应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混

    合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收

    集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
    3. 尿液:
    用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收

    集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑

    脊液参照此实行。
    4. 细胞培养上清:
    检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000

    -3000转/分)。仔细收集上清。
    5. 培养细胞
        检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液

    ,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白

    萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右

    (2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形

    成,应再次离心。
    6. 组织标本
        切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液

    氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入

    一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆

    器将标本匀浆化。ELISA试剂盒离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细

    收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。

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