前期准备
利用进行临床检验常见的样本一般包括血液(指
血,静脉血),尿,粪便,脑脊液,胸腹水,前列腺液,精液
,阴道分泌物等,这些样本收集的时间、方法和保存都有一定
的要求。
样本实验准备
在收集样本前都必须有一个完整的计划,必须清楚要检测的成
份是否足够稳定。对收集后当天就进行
检测的样本,ELISA试剂盒及时储存在4℃备用。对于隔天再检测的样本,及
时分装后冻存在-20℃备用,有条件的,-70℃冻存备用。
标本应避免反复冻融。
液体类标本: 包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、
细胞培养上清等。
1. 血清:
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000
转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离
心。
2. 血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混
合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收
集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
3. 尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收
集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑
脊液参照此实行。
4. 细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000
-3000转/分)。仔细收集上清。
5. 培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液
,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白
萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右
(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形
成,应再次离心。
6. 组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液
氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入
一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆
器将标本匀浆化。ELISA试剂盒离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细
收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
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