1. 选用原代生长状态好（90-95%），生长数量大于5×105进行传代。
2. 吸除原代细胞培养液。用含双抗的1×PBS（pH7.4）清洗细胞培养瓶2次。
3. 1ml细胞消化液加入细胞培养瓶，轻轻摇动，使细胞消化液覆细胞培养瓶底。
4. 细胞培养瓶置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养数分钟后，在显微镜下观察原代细胞的消化状态。
请记住：如贴壁细胞逐渐趋于圆形、部分悬浮后，用手指轻轻拍打细胞培养侧部或底部至大部分贴壁细胞悬浮，加入细胞终止液，终止消化。每种原代细胞的消化时间是有差异的。
5. 吹打培养瓶中悬浮细胞若干次，再吸出细胞悬浮液，转入15ml离心管中，1000rpm离心5分钟。
6. 弃离心管中液体，加入原代细胞培养液重悬细胞。细胞计数，确定细胞数量。
细胞分瓶后，加入适量原代细胞培养液至培养瓶中，置于5%CO2、95%空气、37oC培养箱静置培养24小时。
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