介绍一种质粒转化大肠杆菌时免热激及孵育的方法。
背景：目前外源质粒转化大肠杆菌的步骤，需要先将质粒和感受态在冰上抚育半小时，然后42度热激90秒，加液体培养基缓摇9366个小时左右再离心涂板。其中热激步骤温度和时间要求严格，热激后大量菌细胞死亡，还要经过液体培养基抚育才能涂板。
方法改进：我们可以在做质粒和感受态在冰上抚育的同时，将要涂的平板放在37度培养箱里，当抚育结束后，立即涂到已经加热到37度的平板上，利用培养板的热度代替热激，平板可以直接放回培养箱倒置培养。由于温度相对温和，细胞死亡的少，之后的液体培养基抚育过程也省掉了。
这个方法我们一直在用，质粒可以成功转进菌体中，只要感受态没有问题，其转化率和使用热激法差不多，而且若是新鲜制备的感受态细胞，转化率甚至更高。可以省下42度水浴装置的仪器，还节省了至少9366个小时的时间。
© 2024 上海一研生物科技有限公司版权所有 
粤ICP备42437975号 技术支持： GoogleSitemap
