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    细胞内还原型谷胱甘肽((GSH)的测定

    点击次数:7405  更新时间:2015-12-21

    (一)原理

        细胞内还原型谷胱甘肽((GSH)可保护免受损伤,药物或毒物可通过使细胞内GSH耗竭而导致细胞受损。

    (二)材料

    1.96孔培养板培养的待测细胞与对照组细胞。

    2.O.1mol/L PBS(pH8.0) 0.1mol/L Na2HPO4溶液170ml和O.1mol/L NaH2PO 4溶液34ml混匀。

    3.DTNB溶液用0.1mol/L PBS配成6.5%TCA溶液。

    (三)方法

        培养的96孔培养板,倾去培养液,加入O.1mol/L PBS洗涤各孔,倒掉PRS,加入6.5%TCA 0.05ml,4℃放置30min,再加入0.25ml的DTNB溶液,10min后在420nm处比色。

    (四)结果

        可计算受试物组细胞GSH的相对含量(%)

        细胞GSH的相对含量越高,则细胞毒性越低;细胞GSH的相对含量越低,则细胞毒性越高。也可计算细胞GSH的含量,但要先绘制GSH的标准曲线,方法类似于蛋白质标准曲线。

    (五)注意事项

        若细胞在24孔培养板或6孔培养板上培养,可将细胞刮下来,经超声破碎或用溶解液溶解,再测定GSH量,但在96孔培养板上培养则不必刮,可直接经6.5%TCA提取GSH,直接比色。

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