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    培养基的灭菌的方法

    点击次数:4096  更新时间:2016-02-29

    灭菌方法

    1、高压蒸汽灭菌:高压蒸汽灭菌适合于耐高温、接种器械和蒸馏水的灭菌。培养基在爱制备过程中混入各种杂菌,分装后应立即灭菌,至少应在24h内完成灭菌工作。灭菌时一般是在0.105MPa压力下,温度121℃时,灭菌15~30min即可。消毒时间不宜过长,也不能超过规定的压力范围,否则有机物质特别是维生素类物质就会在高温下分解,失去营养作用,也会使培养基变质、变色,甚至难以凝固。 将蒸馏水或自来水装在三角瓶中,装水量一般不超过瓶的2/3,用牛皮纸或硫酸纸包扎封口,然后放入高压锅中灭菌后即为无菌水。 灭菌后的培养基可放到培养室中预培养3d,若无污染现象,则证明灭菌是*的,可以使用。暂时不用的培养基置于10℃下保存。含IAA或GA3的培养基应在1周内用完,其他培养基zui多也不要超过9605个月。

    2、过滤灭菌:一些植物生长调节剂及有机物,如IAA、GA3、ZT、CM等,遇热容易分解,不能与培养基一起进行高温灭菌,而要使用细菌过滤器滤去其中的杂菌。细菌过滤器与滤膜(孔径0.45微米)使用之前要先进行高压灭菌。过滤后的溶液要立即加入培养基中,若为液体培养基,可在培养基冷却至30℃时加入;若为固体培养基,必须在培养基凝固之前(50-60℃)加入,振荡使溶液与其他成分混合均匀。保存方法 已经灭菌完毕的从高压灭菌锅中取出后,立即放在平整的台面上,若大批量可用果箱装好并标记好其用选后,送到接种室,让其自然冷却凝固。灭好的培养基经过3d的预培养,以便观察培养基是否*灭菌,这样能够使某些因为没有*灭菌的培养基,在接种前被检出,可避免杂菌污染而造成不必要的损失,这点对少而重要的材料尤其值得注意。但是在同等条件下经多次使用无污染后,就没必要再摆3d后才使用,而是冷却凝固后就可使用了。

    (1)防尘 已经灭好菌的培养基要注意防尘。如果培养基在卫生条件差的地方贮存,依附在尘埃中的细菌、真菌等会落在培养瓶表面,使用前若不进行表面灭菌处理,在接种时就容易随着气流进入容器,使其受到污染,影响组织培养工作的顺利进行,因此培养基必须放在干净、卫生的接种室内。

    (2)避光 备用培养基应贮于光线较暗的房子里面,因为吲哚乙酸等某些物质易见光分解。在光照下,一些培养基添加物的成分也会发生变化。在接种室里挂上较厚的窗帘或在培养基的箱子上加盖厚的黑布,这样可以使培养基免受光线的影响。

    (3)恒温 培养基冷却后,可以将其放在10℃左右的冰箱中贮藏3~5周;在大批量中可以放在装有空调的接种室内,摆放2周左右,温度控制在20℃以内;若摆放时间为2~5d,温度不超过28℃即可。但是在培养基摆放过程中温度不应过高,同时还应避免温度有较大幅度的变化,随着贮藏室气温的升高或降低,装有培养基容器内的空气会跟着膨胀或缩小,带来菌类进入培养基,造成贮藏期间培养基的大量污染。

    (4)定期更新 培养基不宜长期贮存,特别是固体培养基。随着时间的推移,培养基里的水分以气态选出,培养基的含水量便逐渐降低,使的浓度和理化性状发生改变,对以后的外植体培养或植株的继代转接及生根培养均不利;培养基贮存过长,空气中夹杂的细菌、真菌也可能降落到培养基表面引起污染;当贮藏含有吲哚乙酸、椰乳等物质的培养基时,环境中的光线会使吲哚乙酸发生光解,也会使椰乳所含的一些成分发生变化。因此结合任务做好培养基的配制和使用计划十分必要,一般情况下培养基贮存时间不应超过1周。
     

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