产气肠杆菌PCR试剂盒属于肠杆菌科肠杆菌属,为革兰氏阴性兼性厌氧杆菌,是一种条件致病菌。当宿主机体状态改变或细菌进入肠道以外的部位,可引起呼吸道、泌尿生殖道、血液等感染,也是老年人感染或院内获得性肺炎的常见致病菌。产气肠杆菌可以产生B一内酰胺酶,多年来由于抗生素的滥用,该类细菌引起医院感染的概率不断上升,已成为院内感染常见的条件致病菌。
产气肠杆菌PCR试剂盒具有以下优点:
1、本发明采用基因克隆技术,将产气肠杆菌Cad基因片段插入到载体pMD18-T中,获得含有Cad基因片段的重组质粒,以此作为标准品。根据产气肠杆菌Cad基因片段编码基因序列设计并合成一组特异性引物和探针,优化PCR反应条件,建立以实时荧光定量聚合酶链反应为平台的检测方法,并对所建立的方法进行评估。
2、本发明通过提取产气肠杆菌的基因组DNA,结合实时荧光定量PCR检测技术,可达到准确定量待测标本中产气肠杆菌含量的目的,对判断产气肠杆菌活性菌的含量以及后续研究泌尿道感染具有重要意义。
3、本发明快速、灵敏、特异性好。
产气肠杆菌PCR试剂盒的检测流程:
检测样品前处理
1、食品样品的直接检测:样品处理参考国标GB/T 4789.5-2012进行。以无菌操作取检样25g(mL),加入装有灭菌225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质杯,用旋转刀片式均质器以8 000 r/min~10 000 r/min均质;或加入装有225mL志贺氏菌增菌肉汤的均质袋中,用拍击式均质器连续均质1 min~2 min,液体样品振荡混匀即可。于41.5 ℃±1℃,厌氧培养16 h~20 h。
2、疑似菌落检测:直接用接种环或者无菌TIP头挑去肉眼可见的菌团,配成1×、10×两个梯度稀释液,分别在PCR管中按照以下步骤扩增。