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    PCR试剂盒的使用注意事项有哪些

    点击次数:601次  更新时间:2020-11-09
       PCR试剂盒是从土壤农杆菌CP4菌株中分离得到的抗除草剂草甘膦基因,是转基因植物研究中较为常用的一种筛选标记基因。
     
      PCR试剂盒的使用注意事项有哪些:
      注意事项一:保存
      未拆封的试剂盒,请于-20℃保存;拆封之后,应在4℃保存。
      在试剂消耗量较少的实验室,可以考虑将按照组分单独分装,后保存在-20℃。
     
      注意事项二:配置
      试剂盒内所含各组份都是混合物,在静置情况下会发生分层现象,因此,现配现用,震荡混匀,避免反复冻融,避免预混。其中,反复冻融将大幅缩短使用寿命。
      在扩增体系的选择时,尽量选择标准体系,再根据检材情况加入模板,之后切勿忘记以PCR用水补足扩增体系。
     
      注意事项三:切勿预混
      因试剂盒中酶的活性较高,将各组份按照比例混合之后,即使没有达到它的较适温度,但也可能发生与引物结合,导致实验结果出现丢位点或者杂合子纯化等情况。
     
      注意事项四:阴阳性参照
      实验结果会受提取、扩增和电泳等多个环节的影响,因此,每次扩增实验都应该添加一组阴阳性参照。这样,当结果异常的时,我们就可以结合阴阳性参照的表现,排查问题出在哪个环节。
     
      注意事项五:阳性参照是否通用
      虽然多数试剂盒的阳性参照都是007,但是案件试剂盒和建库试剂盒的阳性参照浓度不同,通常来说案件试剂盒的浓度更低。
     
      注意事项六:扩增程序
      扩增程序是能够将试剂盒更大效能发挥出来而设计,切勿随意更改;再者,不同试剂盒所含酶的升温模式也有不同,因此,在设置扩增程序时,要选择对应的升温模式。
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