原代细胞的培养是指直接从机体取下细胞、组织和器官后立即进行培养。因此,较为严格地说是指成功传代之前的培养,此时的细胞保持原有细胞的基本性质,如果是正常细胞,仍然保留二倍体数。因为可以模拟机体的功能,主要用于:生物医药产业如药物筛选、药物代谢和毒理研究、癌症药物的研究。
原代细胞的传代和冻存过程:
细胞传代:
原代细胞有间隙抑制接触不良反应,所以细胞不能到达全部的密度的时候传代,一般有效的建议观察细胞的生长周期,原代细胞在细胞密度达到85%左右的时候传代较佳,当生长至全部汇合时,它就会衰老。记住,所有的原代细胞不是全纯,因此我们要尽量减少污染细胞的生长。当细胞传代时,使用低浓度的胰蛋白酶,也可以尝试下整体消化套装,并在显微镜下密切监测细胞。此外,记得在胰蛋白酶消化后*中和细胞中的胰酶,因为任何活性的胰蛋白酶都将损伤细胞。
细胞冻存:
通常不推荐重新冻存原代细胞,因为这可以促进细胞衰老和/或导致功能变化。原代细胞非常敏感,重新冻结可能导致细胞死亡或损伤。
与细胞系不同,原代细胞增殖有限,我们建议尽早使用原代细胞进行实验以防止遗传漂移,如果你正在使用一个增殖困难的细胞类型,你应该密切监测细胞形态,因为少量混杂的细胞(如成纤维细胞)可能随着时间的推移,大量生长从而成为主要细胞。