细胞色素试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中细胞色素C(Cyt-C)水平。用纯化的细胞色素C(Cyt-C)抗原包被微孔板,制成固相抗原,往包被单抗的微孔中依次加入细胞色素C(Cyt-C),再与HRP标记的细胞色素C(Cyt-C)抗原结合,形成抗体-抗原-酶标抗体复合物,经过*洗涤后加底物TMB显色。在HRP酶的催化下转化成蓝色,并在酸的作用下转化成黄色。颜色的深浅和样品中的细胞色素C(Cyt-C)呈正相关。用酶标仪在450nm波长下测定吸光度(OD值),通过标准曲线计算样品中细胞色素C(Cyt-C)浓度。
细胞色素试剂盒对标本处理:
1.只对试剂盒本身负责,不对因使用该试剂盒所造成的样本消耗负责,请使用者使用前充分考虑到样本的可能使用量,预留充足的样本。
2.实验前应预测标本含量,如果标本浓度过高,应对标本进行稀释,使稀释后的标本符合试剂盒的检测范围,计算时再乘以相应的稀释倍数。
3.若所检样本不包含在说明书所列样本之中,建议进行预实验验证其有效性,并注意留存样本。
4.使用化学裂解液制备的组织匀浆或细胞提取液可能会由于某些化学物质的引入导致ELISA实验结果偏差。
5.若样本为细胞培养上清,因该类样本干扰因素较多,如:细胞状态、细胞数量、采样时间等,所以可能存在检测不出的情况。
6.某些天然蛋白或重组蛋白,包括原核及真核重组蛋白,可能因为与本产品所使用的检测抗体及捕获抗体不匹配,而不被检测出。
7.建议使用新鲜样本,保存时间过长可能会存在蛋白降解或变性导致实验结果偏差。