感觉态细胞描述的是细胞所处的一种状态,在这种状态下,细胞膜可以允许外源重组质粒进入细胞内部,且不会被限制性核酸内切酶水解。
感觉态细胞的实验操作步骤:
将电转杯和微量离心管至于冰上。
从冰箱取出电转感受态细胞,放置在冰盒中直至*融化。
当细胞溶解*后,轻轻拍打混匀。取出细胞至置于冰上的预冷微量离心管中。
如果使用克隆或连接试剂盒的连接Buffer,取热灭活的连接产物到细胞中(没有进行热灭活的连接产物会抑制转化反应),用枪头轻轻搅动;不要上下吹打混匀,这样会产生气泡并使细胞升温。使用连接产物会引起电转过程中的电弧。
轻轻的将细胞/DNA混合物转移至预冷的电转杯中,注意避免产生气泡。用手指快速地将试管向下轻弹,使细胞沉积在井电转杯的底部。根据以上推荐的电转条件进行电转。
在脉冲10s内,加RecoveryMedium到电转杯,用枪上下吹打重悬细胞,然后将含有细胞的培养基转移到无菌培养管中。
将培养管放在摇床上,37℃培养1h。
从培养管中取转化后的细胞涂布于含特定抗生素的LB(或其他培养基)琼脂糖平板上。
注意事项
①600nm波长处的OD值超过0.5要重新接种,重新培养;
②该过程中所有用到的培养基均是无抗性的。