感觉态细胞在基因工程实验中,经常要使用各种感受态细胞进行DNA的转化操作。转化指同源、异源的“裸露”的DNA分子被感受态细胞摄取并得到表达的基因水平转移过程。感受态细胞的制备是分子生物学研究中的一个重要环节,其制备质量的好坏直接影响到后续实验工作的进行。
感觉态细胞的热激与转化:
所谓转化,即重组DNA分子体外构建完成后,导入感受态细胞,使之无性繁殖并高效表达外源基因或直接改变其遗传性状的过程。转化中常用的DNA类型是质粒。
冰上融化后,取50ul感受态,加入目的DNA(一般是质粒),轻轻混匀。然后将细胞和质粒的混合物在冰上放置30分钟。
42℃水浴中热激45秒(不同的感受态菌株热激时间不一样,即使同一感受态不同的有的热激时间也不相同,所以要严格按照说明书上的热激时间!)
然后快速将管转移到冰浴中2分钟,该过程不要摇动离心管。然后向每个离心管中加入无菌的SOC或LB培养基,混匀后置于37℃,200rpm培养1小时,使细菌复苏。
根据实验要求(质粒,重组连接产物转化),吸取不同体积已转化的感受态细胞加到含相应抗生素的LB琼脂培养基上,将细胞均匀涂开。将平板置于37℃至液体被吸收,倒置平板,37℃过夜培养。第二天,被质粒转化过的细菌将会形成菌落。接下来,计数菌落数目来计算转化效率,它是成功转化菌落的数目除以总DNA的量得到的数值。