原代细胞的实验要点:
1、本方法适用于贴壁细胞培养,而不适用于悬浮细胞培养,悬浮细胞可使用滴片法;
2、所使用的盖玻片应该为优质玻璃,并经过铬酸洗液处理;
3、盖玻片非常薄,易碎,取放盖玻片时动作要轻;
4、如果需要更多生长状态一致的细胞,可以使用较大的培养皿,但不宜过大,以避免培养液的浪费和增加污染机率;
5、如果细胞贴壁生长能力较差,可将盖玻片在多聚赖氨酸溶液中浸泡5-10分钟并自然晾干。
原代细胞的注意事项:
1、收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象。
2、先不开瓶盖,瓶身擦拭酒精后放在培养箱静置数小时,稳定细胞状态,切忌在温箱内静置过夜。
3、静置后镜检,拍照,记录细胞状态。建议传代后也拍照记录细胞生长情况。
4、贴壁细胞:若细胞密度超过80%,可正常传代;若未超过80%,收集细胞瓶内的培养基,留8ml继续培养至80%左右再传代,瓶盖可稍微拧松。
5、细胞瓶内的培养基含血清和双抗,可收集后4℃保存备用,可补加2%血清。刚开始传代时建议一半用细胞瓶内的培养基,一半用客户自备的培养基,使细胞逐渐适应培养条件,以免因不适应而造成生长状态不佳。
6、细胞胰酶消化液建议使用PBS配制,细胞运输和保存:
可选择干冰运输及发送复苏存方式:干冰运输,收到后立即转入液氮冻存或直接复苏;收到后应继续生长,传代达到细胞生长状态良好时,再进行冻存。