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    生物细胞的裂解方式-培养细胞

    点击次数:1343次  更新时间:2015-05-06

    细胞样品:

    1. 融解RIPA裂解液,混匀。取适当量的裂解液,在使用前数分钟内加入PMSF,使PMSF的zui终浓度为1mM。
    2. 对于贴壁细胞:去除培养液,用PBS、生理盐水或无血清培养液洗一遍(如果血清中的蛋白没有干扰,可以不洗)。按照6孔板每孔加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。用枪吹打数下,使裂解液和细胞充分接触。通常裂解液接触细胞1-2秒后,细胞就会被裂解。
    对于悬浮细胞:离心收集细胞,用手指把细胞用力弹散。按照6孔板每孔细胞加入150-250微升裂解液的比例加入裂解液。再用手指轻弹以充分裂解细胞。充分裂解后应没有明显的细胞沉淀。如果细胞量较多,必需分装成50-100万细胞/管,然后再裂解。
    3. 充分裂解后,10000-14000g离心3-5分钟,取上清,即可进行后续的PAGE、Western和免疫沉淀等操作。
    裂解液用量说明:通常6孔板每孔细胞加入150微升裂解液已经足够,但如果细胞密度非常高可以适当加大裂解液的用量到200微升或250微升。

    500mg 聚丙烯酸树脂Ⅳ 供鉴别用 常温,避光 190053-201001
    200mg 聚丙烯酸铵酯Ⅰ 供鉴别用 常温,避光 190054-201001
    200mg 聚丙烯酸铵酯Ⅱ 供鉴别用 常温,避光 190055-201001
    1ml 甲醇 供残留溶剂检查用 常温,避光 130100-200901
    1ml 正丙醇 供残留溶剂检查用 常温,避光 130101-200901
    1ml 异丙醇 供残留溶剂检查用 常温,避光 130102-200901
    1ml 乙腈 供残留溶剂检查用 常温,避光 130103-200901
    1ml 乙酸乙酯 供残留溶剂检查用 常温,避光 130104-200901
    1ml 四氢呋喃 供残留溶剂检查用 常温,避光 130105-200901
    1ml 乙醇 供残留溶剂检查用 2-8℃,避光 130106-200901
    1ml 二氯甲烷 供残留溶剂检查用 常温,避光 130105-200901
    1ml 苯 供残留溶剂检查用 常温,避光 130109-200901
    1ml 吡啶 供残留溶剂检查用 常温,避光 130110-200901
    1ml 二甲基亚砜 供残留溶剂检查用 2-8℃,避光 130106-200901
    1ml 环己烷 供残留溶剂检查用 常温,避光 130113-200901
    100mg 氯霉素 效价测定 2-8℃,避光 130303-200614
    200mg 土霉素 效价测定 2-8℃,避光 130305-200720
    200mg 四环素 效价测定 2-8℃,避光 130306-200918
    200mg 红霉素 效价测定 2-8℃,避光 130307-200716
    200mg 链霉素 效价测定 2-8℃,避光 130308-200713
    200mg 新霉素 效价测定 2-8℃,避光 130309-200811
    100mg 多粘菌素B 效价测定 2-8℃,避光 130313-
    200mg 卡那霉素 效价测定 2-8℃,避光 130319-200710
    100mg 杆菌肽 效价测定 2-8℃,避光 130320-200709
    200mg 庆大霉素 效价测定 2-8℃,避光 130326-200314
    200mg 粘菌素 效价测定 2-8℃,避光 130327-200305

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