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    底物消减文库和肽段连接酶的底物特异性

    点击次数:1041次  更新时间:2015-06-25

    底物消减文库
    这是一种改良的底物噬菌体技术,用于区别两种不同蛋白酶的底物特异性。首先的几轮筛选使用*种蛋白酶筛选底物文库,将阳性底物分离出来。之后,又用第二个酶底物对此阳性底物进行筛选,分离得到非底物序列。结果,得到的序列能够被*个酶水解,但是不能够被第二个蛋白酶水解。这种方法被用于区别纤溶酶原激活物t-PA和u—pA的特异性。尽管两种蛋白酶都可以切割在P2和P1位点上的同一种GR序列,但是通过这种方法发现u-PA优先切割P3位点的丝氨酸,而t-PA更偏向于切割体积较大的氨基酸,如酪氨酸和精氨酸。

    肽段连接酶的底物特异性
    多种底物噬菌体展示技术被用于阐明一个工程连接酶的底物特异性。一种其活性位点221位丝氨酸突变成半胱氨酸、225位脯氨酸突变成丙氨酸的枯草杆菌蛋白酶变异体,被发现可以将脂化的肽段连接到其他肽段或的N末端。通过将噬菌体展示的hGH前三个密码子随机化制备底物噬菌体文库,让它与枯草杆菌蛋白酶变异体在生物素连接的肽脂(亚氨基生物素—KGAAPF-甘油—F—酰氨)存在的情况下一起反应,用抗生物素蛋白的琼脂糖珠捕获而分离连接后的底物噬菌体。这样,文库中那些含有连接反应的良好亲核试剂的文库多肽就被选择性地富集。以此方法得到的结果与使用合成底物得到的结果符合得很好,尤其是在P1,位点上。

    英文名称 Homo sapiens (Human) 羧酸酯酶3(CES3)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
    英文名称 Homo sapiens (Human) 羧酸酯酶2(CES2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
    英文名称 Rattus norvegicus (Rat) 羧酸酯酶1(CES1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
    英文名称 Homo sapiens (Human) 羧酸酯酶1(CES1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
    英文名称 General 羧甲基赖氨酸(CML)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
    英文名称 Homo sapiens (Human) 羧基端结合蛋白2(CTBP2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
    英文名称 Homo sapiens (Human) 髓样前体细胞抑制因子2(MPIF2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
    英文名称 Mus musculus (Mouse) 髓样前体细胞抑制因子2(MPIF2)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T
    英文名称 Homo sapiens (Human) 髓样前体细胞抑制因子1(MPIF1)检测试剂盒(酶联免疫吸附试验法) 规格: 48T/96T

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