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一、菌种保藏的目的

微生物在使用和传代过程中容易发生污染、变异甚至死亡,因而常常造成菌种的衰退,并有可能使优良菌种丢失。菌种保藏的重要意义就在于尽可能保持其原有性状和活力的稳定,确保菌种不死亡、不变异、不被污染,以达到便于研究、交换和使用等诸方面的需要。

二、菌种保藏的原理

无论采用何种保藏方法,首先应该挑选典型菌种的优良纯种来进行保藏,保藏它们的休眠体,如分生孢子、芽孢等.其次,应根据微生物生理、生化特点,人为地创造环境条件,使微生物长期处于代谢不活泼、生长繁殖受抑制的休眠状态.这些人工造成的环境主要是干燥、低温和缺氧,另外,避光、缺乏营养、添加保护剂或酸度中和剂也能有效提高保藏效果。

三、菌种保藏的方法

液氮超低温保藏法简称液氮保藏法或液氮法.它是以甘油、二甲基亚砜等作为保护剂,在液氮超低温（-196℃）下保藏的方法.其主要原理是菌种细胞从常温过渡到低温,并在降到低温之前,使细胞内的自由水通过细胞膜外渗出来,以免膜内因自由水凝结成冰晶而使细胞损伤.美国ATCC菌种保藏中心采用该法时,把菌悬液或带菌丝的琼脂块经控制致冷速度,以每分钟下降1℃/min 的速度从0℃直降到-35℃,然后保藏在-150℃～-196℃液氮冷箱中.如果降温速度过快,由于细胞内自由水来不及渗出胞外,形成冰晶就会损伤细胞.据研究认为降温的速度控制在(1～10)℃/min,细胞死亡率低；随着速度加快,死亡率则相应提高。

液氮低温保藏的保护剂,一般是选择甘油、二甲基亚砜、糊精、血清蛋白、聚乙烯氮戊环、吐温80等,但zui常用的是甘油（10%～20%）.不同微生物要选择不同的保护剂,再通过试验加以确定保护剂的浓度,原则上是控制在不足以造成微生物致死的浓度。

此法操作简便、、保藏期一般可达到15年以上,是目前被*的zui有效的长期保藏技术之一.除了少数对低温损伤敏感的微生物外,该法适用于各种微生物菌种的保藏,甚至连藻类、原生动物、支原体等都能用此法获得有效的保藏.此法的另一大优点是可使用各种培养形式的微生物进行保藏,无论是孢子或菌体、液体培养物或固体培养物均可采用该保藏法.其缺点是需购置超低温液氮设备,且液氮消耗较多,操作费用较高。

要使用菌种时,从液氮罐中取出安瓿瓶,并迅速放到35～40℃温水中,使之冰冻熔化,以无菌操作打开安瓿瓶,移接到保藏前使用的同一种培养基斜面上进行培养.从液氮罐中取出安瓿瓶时速度要快,一般不超过1min,以防其他安瓿瓶升温而影响保藏质量.并且取样时一定要戴手套以防止意外爆炸和冻伤。