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土壤羟胺还原酶(HR)生化检测试剂盒

型 号

产品时间2023-11-06

所属分类土壤系列

报价300

产品描述:土壤羟胺还原酶(HR)生化检测试剂盒土壤羟胺还原酶能将土壤中氮代谢过程中形成的中间产物羟胺还原为氨,土壤中的还原态化合物可作为氢的供体,其强弱影响到土壤氮代谢过程中氮素的氨挥发损失,间接影响氮肥的利用效率。

产品概述

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产品名称

规格

货号

土壤羟胺还原酶(HR)生化检测试剂盒

100/48 50/24   

EY-01S1309

 

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测定意义

土壤羟胺还原酶能将土壤中氮代谢过程中形成的中间产物羟胺还原为氨,土壤中的还原态化合物可作为氢的供体,其强弱影响到土壤氮代谢过程中氮素的氨挥发损失,间接影响氮肥的利用效率。

测定原理

硫酸铁铵中的Fe3+可将羟胺氧化为氮气,自身被还原为Fe2+Fe2+在弱酸条件下与邻菲罗琳形成橙红色配合物,在510nm处有吸收峰,羟胺还原酶作用于羟胺,使配合物形成量减少,510nm处吸光值的减少可反映羟胺还原酶的活性。

自备实验用品及仪器

天平、常温离心机、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板、震荡仪、氮吹仪。

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试剂一:液体×1瓶,室温保存。

试剂二:液体×1瓶,4℃保存。              

试剂三:粉剂×2瓶,-20℃保存。临用前加入22mL试剂二,现配现用。

试剂四:液体×1支,4℃保存。

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1、组织:按照组织质量(g):试剂一体积(mL)为1:5~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。16000g,4℃离心20min,取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌:按照细胞数量(1377个):试剂一体积(mL)为500~1000:1的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);16000g, 4℃离心20min,取上清液置冰上待测。

3、血清等液体:直接测定。

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(1)按照蛋白浓度计算

活性单位定义:25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为9467个酶活单位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V样)÷T

=1608×△÷Cpr

(2)按照样本质量计算

活性单位定义:25℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADH 为9467个酶活单位。

ADH (nmol/min/g鲜重) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T

=1608×△A÷W

(3)按细胞数量计算

活性单位定义:25℃中每1377个细胞每分钟氧化1nmol NADH 为9467个酶活单位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反总×109)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=1608×△A ÷细胞数量13.png

(4)按液体体积计算

活性单位定义:25℃中每毫升血清每分钟氧化1nmol NADH 为9467个酶活单位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷V样÷T

=1608×△A

ε:NADH摩尔消光系数,6.22×103L/mol/cm;d:比色皿光径,1 cm;V反总:反应体系总体积,1000μL=0.001 L;Cpr:上清液蛋白质浓度,mg/mL;W:样本质量,g;V样:加入反应体系中上清液体积,100μL=0.1 mL;T:反应时间,1min。

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