参数规格:
产品名称:单核细胞增生李斯特菌PCR检测试剂盒
英文名称:Listeria monocytogenesPCR
产品规格:50T
产品运输:低温运输
产品保存:-20℃保存
产品有效期:一年
产品特点:
产品仅用于科研本产品就是根据保守区设计引物而开发的高灵敏荧光定量 PCR 产品。
单核细胞增生李斯特菌PCR检测试剂盒原理是由一对引物介导,能在动植物体外对特定基因(DNA)片断进行快速酶促扩增,经过n个热循环扩增,扩增产物中所含特定基因数是原始模板数的(1+E)n(0<E<1,扩增效率=倍,使得检测扩增产物中的特定基因成为可能。
产品仅用于科研特异性强
PCR反应的特异性决定因素为:
①引物与模板DNA特异正确的结合;
②碱基配对原则;
③Taq DNA聚合酶合成反应的忠实性;
④靶基因的特异性与保守性。
PCR实验方法步骤:
方法
1:在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2:调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放线放线杆菌探针法荧光定量PCR试剂盒结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4:PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μl进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
PCR实验步骤:
典型的PCR由(1)高温变性模板;(2)引物与模板退火;(3)引物沿模板延伸三步反应组成一个循环,通过多次循环反应,使目的DNA得以迅速扩增。其主要步骤是:
将待扩增的模板DNA置高温下(通常为93℃-94℃)使其变性解成单链;
人工合成的两个寡核苷酸引物在其合适的复性温度下分别与目的基因两侧的两条单链互补结合,两个引物在模板上结合的位置决定了扩增片段的长短;
耐热的DNA聚合酶(Taq酶)在72℃将单核苷酸从引物的3’端开始掺入,以目的基因为模板从5’→3’方向延伸,合成DNA的新互补链。
芴甲氧羰基-S-乙酰氨甲基-L-半胱氨酸/Na-芴甲氧羰酰基-S-(乙酰基-氨甲基)-L-半胱氨酸/FMOC-S-乙酰氨甲基-L-半胱氨酸/Fmoc-Cys(Acm)-OH特纯,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,86060-81-32~8°C
芴甲氧羰基-N-三苯甲基-L-组氨酸/N-Fmoc-N'-三苯甲基-L-组氨酸/Nα-FMOC-N(IM)-TRITYL-L-组氨酸/N-芴甲氧羰基-N'-三苯甲基-L-组氨酸/N-(9-芴甲氧羰基)-N'-三苯甲基-L-组氨酸/Fmoc-His(Trt)-OH特纯,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,109425-51-62~8°C
芴甲氧羰酰基-N-甲基-L-缬氨酸/Fmoc-N'-甲基-L-缬氨酸/Fmoc-N-Me-Val-OH特纯,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,84000-11-32~8°C
芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-酪氨酸/Fmoc-O-叔丁基-L-酪氨酸/N-(9-芴甲氧羰基)-叔丁基-L-酪氨酸/N-(9-芴甲氧羰基)-O-叔丁基-L-酪氨酸/Fmoc-Tyr(tBu)-OH特纯,98.5%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,71989-38-32~8°C
芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-苏氨酸/Fmoc-O-叔丁基-L-苏氨酸/N-(9-芴甲氧羰基)-叔丁基-L-苏氨酸/N-(9-芴甲氧羰基)-O-叔丁基-L-苏氨酸/Fmoc-Thr(tBu)-OH特纯,98%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,71989-35-02~8°C
马尿酰-组氨酰-亮氨酸/N-Hippuryl-His-Leu hydrateBR,98%25毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,207386-83-2保存:-20℃
O-乙酰-L-丝氨酸盐酸盐/O-乙酰-L-氢氯化丝氨酸/O-Acetyl-L-serine hydrochlorideBR,98%10毫克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,66638-22-0保存:-20℃
N,N'-二琥珀酰亚胺基碳酸酯/N,N'-琥珀酰亚胺基碳酸酯/N,N-琥珀酰氨基碳酸酯/N,N'-碳酸二琥珀酰亚胺基/N-氢氧化琥珀酰亚胺/DSC高纯,98.5%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,74124-79-1RT
氨基酸螯合铁/10% Iron chelate高纯50克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,RT
DL-高半胱氨酸/DL-2-氨基-4-巯基丁酸/DL-类半胱氨酸/DL-巯基丁氨酸/DL-同型半胱氨酸/同型半胱氨酸/升半胱胺酸/2-氨基-4-巯基丁酸/DL-HomocysteineBR,95%1克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,454-29-5保存:-20℃
Nα-FMOC-Nω-PBF-L-精氨酸/Fmoc-Pbf-精氨酸/N-芴甲氧羰酰基-2,2,4,6,7-五甲基二氢苯并呋喃-5-磺酰-L-精氨酸/Fmoc-保护基精氨酸/芴甲氧羰酰-精氨酸/FMOC-NOMEGA-2,2,4,6,7-五甲基苯并呋喃-5-磺酰基-L-精氨酸/Fmoc-Arg(Pbf)-OHBR,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,154445-77-9保存:-20℃
FMOC-L-谷氨酸5-叔丁酯/芴甲氧羰基-L-谷氨酸5-叔丁酯/芴甲氧羰基-O-叔丁基-L-谷氨酸/Fmoc-O-叔丁基-L-谷氨酸/Fmoc-Glu(OtBu)-OHBR,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,71989-18-92~8°C
FMOC-S-叔丁基-L-半胱氨酸/FMOC-硫代叔丁基-半胱氨酸/N-(9-芴甲氧羰基)-S-叔丁基-L-半胱氨酸/N-(9-芴甲氧羰基)-硫代叔丁基-L-半胱氨酸/Fmoc-Cys(tBu)-OHBR,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,67436-13-92~8°C
甘氨酸叔丁酯盐酸盐/盐酸甘氨酸叔丁酯/氨基乙酸叔四丁酯盐酸盐/甘氨酸叔丁基酯盐酸盐/Glycine tert butyl ester hydrochlorideBR,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,27532-96-3RT
单核细胞增生李斯特菌PCR检测试剂盒SOB培养基粉剂,1LD-2-Aminobutyric acid 质量规格:>99%,BR
SOB培养基(pH7.0),500mlNA 质量规格:>98%
SOC培养基粉剂,1LN-(tert-Butoxycarbonyl)-(S)-(+)-3-pyrrolidinol 质量规格:HPLC≥98%,标准品
SOC培养基(pH7.0),500mlAcetoacetanilide 质量规格:>96%,BR
SB固体培养基粉剂(Super Broth),1L5-[(1E)-2-(3,4-Dimethoxyphenyl)ethenyl]-1,3-benzenediol 质量规格:HPLC≥98%,标准品
SOB固体培养基粉剂,1L2-Amino-4-cyanopyridine 质量规格:>95%,BR,来源马心
SOC固体培养基粉剂,1L5(6)-Aminofluorescein 质量规格:>95%,BR,来源心
TB固体培养基粉剂(Terrific Broth),1LN-(2-Hydroxyethyl)ethylenediaminetriacetic acid 质量规格:>95%,BR,来源猪心
注意事项:
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行。设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.产品仅用于科研所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
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