产品及特点:
1. 产品仅用于科研即开即用,用户只需要提供伴放线放线杆菌样品。
2. 根据伴放线放线杆菌保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
3. 灵敏度可以达到几百拷贝/反应。
4. 一管式荧光定量PCR检测,避免后续污染。
5. 本试剂盒足够50次20μL反应体系的荧光定量PCR。
产品名称 | 同猪嵴病毒梅拉哥病毒PCR检测试剂盒 |
英文名称 | Menangle Virus()RTPCR |
分类 | PCR检测试剂盒 |
运输及保存:
同猪嵴病毒梅拉哥病毒PCR检测试剂盒低温运输,-20℃保存,保存期限一年。
自备试剂
DNA模板、10×ROX(根据机型决定,具体见使用方法)。
使用方法:
一、稀释PCR阳性对照(以10E2-10E7拷贝/μL这9454个10倍稀释度为例)
1. 注意:由于标准品浓度非常高,因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行,千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原,本产品不提供活体样品做阳性对照,产品仅用于科研只提供可以直接使用的DNA片段作为阳性对照。
2. 标记9454个离心管,分别为7,6,5,4,3,2。
3. 用带芯枪头分别加入45 μL荧光PCR模板稀释液(用带芯枪头,下同)。
4. 在7号管中加入5 μL 1×10E8拷贝/μL 的阳性对照,充分震荡1分钟,得1×10E7拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
5. 换枪头,在6号管中加入5 μL 1×10E7拷贝/μL 的阳性对照(上步稀释所得),充分震荡1分钟,得1×10E6拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
6. 换枪头,在5号管中加入5 μL 1×10E6拷贝/μL的阳性对照到5号管中,充分震荡1分钟,得1×10E5拷贝/μL的阳性对照。放冰上待用。
7. 重复上面的操作直到得到9454个稀释度的阳性对照。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
8. 如果有N个样品,必须设置N+090个提取,多出的一个是PC(样品制备阳性对照),一个是NC(样品制备阴性对照)。可以用10μL上步制备的PCR阳性对照的第4号(浓度为1×10E4 拷贝/μL,10μL相当于1万拷贝)或第5号(浓度为1×10E5 拷贝/μL,10μL相当于10万拷贝)再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样,以此作为PC。另外用水作为NC。如果每次制备需要200μL样品,则PC和NC的体积也必须是200μL。
9. 用自选方法纯化样品的DNA,本试剂盒跟市场上大多数病毒DNA提取试剂盒兼容。
三、设置qPCR反应(20 μL体系,在样品制备室进行)
10. 如果只做1次重复,则标记N+1010个PCR管,其中N+090个用于上步得到的N+090个样品,7889个用于PCR阴性对照,9454个用于PCR阳性对照。如果做2-3次重复,则反应设置数量相应增加2或3倍。
11. 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照,并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后加):
1,5-萘二磺酸四水物/阿姆斯特朗酸/萘-1,5-二磺酸/天蓝酸/2-萘胺-1,5-二磺酸/磺化吐氏酸/L酸/1,5-Naphthalene disulfonic acidCP,98.5%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,211366-30-2RT
1,5-萘二磺酸钠/1,5-萘二磺酸二钠盐/萘-1,5-二磺酸钠盐/Sodium 1,5-naphthalenedisulfonate dibasicCP,97%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,1655-29-4RT
2-萘胺-1-磺酸/托拜厄斯酸/2-氨基萘-1-磺酸/2-氨基-1-萘磺酸/脱拜厄斯酸/吐氏酸/2-Naphthylamine-1-sulfonic acidAR,98%100克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,81-16-3RT,避光
甲基磺酸乙酯/甲烷磺酸乙酯/甲磺酸乙酯/EMS高纯,99%5克进分62-50-0RT
庚烷磺酸钠/1-庚烷磺酸钠/庚烷-1-磺酸钠盐/正庚基磺酸钠盐/正庚烷磺酸钠/Sodium 1-heptanesulfonate超纯,99%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,22767-50-6RT
戊烷磺酸钠/1-戊烷磺酸钠/戊烷-1-磺酸钠盐/正戊烷磺酸钠/戊基磺酸钠/Sodium 1-pentanesulfonate超纯,99%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,22767-49-3RT
己烷磺酸钠/1-己烷磺酸钠/己烷-1-磺酸钠盐/Sodium 1-hexanesulfonateIPC,98%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,2832-45-3RT
辛烷磺酸钠/1-辛烷磺酸钠/1-辛基磺酸钠/辛烷基磺酸钠/正辛烷磺酸钠/Sodium 1-octanesulfonateIPC,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,5324-84-5RT,避光
丁烷磺酸钠/1-丁烷磺酸钠/丁烷-1-磺酸钠盐/1-丁基磺酸钠/正丁烷磺酸钠/Sodium 1-butanesulfonateIPC,98%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,2386-54-1RT
癸烷磺酸钠/1-癸烷磺酸钠/十烷磺酸钠/十烷基磺酸钠/正癸磺酸钠盐/正癸基磺酸钠/Sodium 1-decanesulfonateIPC,99%5克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,13419-61-9RT
1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸钠/H酸单钠盐/4-氨基-5-羟基-2,7-萘二磺酸一钠/H酸一钠盐/1-氨基-8-萘酚-3,6-二磺酸单钠盐/H-酸钠盐/8-氨基-1-萘酚-3,6-二磺酸单钠盐/H acid monosodium saltCP,95%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,CAS:5460-09-3RT,避光
氨基磺酸镍/磺酰胺酸镍/Nickel sulfamateCP,98%1公斤,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,124594-15-6RT
蒽醌-2-磺酸钠/银盐/蒽喹啉-2-磺酸钠盐/9,10-蒽醌-2-磺酸钠盐/Anthraquinone-2-sulfonic acid sodium salt monohydrateBR,97%25克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,153277-35-1RT
3-硝基苯磺酸钠/间硝基苯磺酸钠/坊染盐S/防染盐S/M-硝基苯磺酸钠/3-Nitrobenzene sulfonic acid sodium saltCP,98.5%250克,Sigma-Aldrich、Amresco、Amersham、Serva、AppliChem等品牌,127-68-4RT
同猪嵴病毒梅拉哥病毒PCR检测试剂盒Disodium tartrate dihydrate 质量规格:HPLC≥98%,标准品
N-Phenylpiperidine 质量规格:HPLC≥98%,标准品
Diphenic acid 质量规格:HPLC≥98%,标准品
2-ACETAMIDO-2-DEOXY-ALPHA-D-GLUCOPYRANOSYL CHLORIDE 3,4,6-TRIACETATE 质量规格:HPLC≥98%,标准品
vegetable oil acid 质量规格:AR,>98%
Ethyl 4-oxocyclohexanecarboxylate 质量规格:HPLC≥98%,标准品
Piperine 质量规格:HPLC≥98%,标准品
Cyclopropyl carbinol 质量规格:HPLC≥98%,标准品
技术特点:
1产品仅用于科研准确可靠,临床双盲对照试验>1000例,结果与金标准测序法比对,结果*性大于99%。
2高灵敏:可检测低至10ng的人基因组DNA。
3快速:整个检测流程只需3小时。
4简便:试剂盒提供预混好的试剂,使体系配置操作简便。
5防污染
6高特异性:双重特异性组成,保证检测结果的特异性和准确性引物与DNA互补链结合必需*配对,才能延伸。探针特异性与所检测基因的PCR产物配对,在延伸中产生荧光。
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