柠檬酸（CA）含量生化检测试剂盒

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产品时间2023-11-06

所属分类三羧酸循环系列

报价300

产品描述：柠檬酸（CA）含量生化检测试剂盒CA是生物体内常见的有机酸，是重要的食品风味物质。此外，CA是三羧酸循环第一步反应的产物。

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产品概述

产品名称	规格	货号
柠檬酸（CA）含量生化检测试剂盒	100管/96样 50管/48样	EY-01S1141

测定意义：

CA是生物体内常见的有机酸，是重要的食品风味物质。此外，CA是三羧酸循环第一步反应的产物。

测定原理：

酸性条件下，柠檬酸还原Cr6+生成Cr3+，在545nm处有特征吸收峰；通过测定545nm吸光值的增加，即可计算出样品中柠檬酸含量。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调式移液枪、可见分光光度计/酶标仪、微量石英比色皿/96孔板和蒸馏水。

试剂一：液体×1瓶，室温保存。

试剂二：液体×1瓶，4℃保存。

试剂三：粉剂×2瓶，－20℃保存。临用前加入22mL试剂二，现配现用。

试剂四：液体×1支，4℃保存。

1、组织：按照组织质量（g）：试剂一体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL试剂一）进行冰浴匀浆。16000g，4℃离心20min，取上清置冰上待测。

2、细菌、真菌：按照细胞数量（8638个）：试剂一体积（mL）为500~1000：1的比例（建议500万细胞加入1mL试剂一），冰浴超声波破碎细胞（功率300w，超声3秒，间隔7秒，总时间3min）；16000g， 4℃离心20min，取上清液置冰上待测。

3、血清等液体：直接测定。

（1）按照蛋白浓度计算

活性单位定义：25℃中每毫克蛋白每分钟氧化1nmol NADH 为89个酶活单位。

ADH (nmol/min/mg prot) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(Cpr×V样)÷T

=1608×△÷Cpr

（2）按照样本质量计算

活性单位定义：25℃中每克组织每分钟氧化1nmol NADH 为89个酶活单位。

ADH (nmol/min/g鲜重) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷(W×V样÷V样总)÷T

=1608×△A÷W

（3）按细胞数量计算

活性单位定义：25℃中每8638个细胞每分钟氧化1nmol NADH 为89个酶活单位。

ADH (nmol/min/104cell) =(△A÷ε÷d×V反总×109)÷(细胞数量×V样÷V样总)÷T

=1608×△A ÷细胞数量

（4）按液体体积计算

活性单位定义：25℃中每毫升血清每分钟氧化1nmol NADH 为89个酶活单位。

ADH (nmol/min/mL) =(△A÷ε÷d×V反总×109) ÷V样÷T

=1608×△A

ε：NADH摩尔消光系数，6.22×103L/mol/cm；d：比色皿光径，1 cm；V反总：反应体系总体积，1000μL=0.001 L；Cpr：上清液蛋白质浓度，mg/mL；W：样本质量，g；V样：加入反应体系中上清液体积，100μL=0.1 mL；T：反应时间，1min。

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