产品名称 | 人心肌成纤维细胞 | 货号 | EY-XY3274 |
英文名称 | 详见说明 | 规格 | 5x105cells/T25或1mL冻存管 |
质量检测:纤维连接蛋白(Fibronectin)或波形蛋白(Vimentin)免疫荧光染色为阳性,纯度高于 90%,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等
产品规格:5x105cells/T25或1mL冻存管
培养基:人心肌成纤维细胞专用培养基
培养条件:气相:95%空气+5%二氧化碳;温度:37℃
换液频率:每2-3天换液一次
消化液:0.25%
产品货期现货,1周左右
运输方式T25培养瓶/ 顺丰快递(包邮)
供应限制仅限于科学研究,绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用
人心肌成纤维细胞采用胶原酶-联合消化结合差速贴壁法制备而来,人心肌成纤维细胞分离自心脏组织;心脏由心肌细胞和非心肌细胞组成,非心肌细胞占细胞总数的70%,其中90%以上的非心肌细胞由心肌成纤维细胞组成。成纤维细胞(Fibroblast)是疏松结缔组织的主要细胞成分,由胚胎时期的间充质细胞分化而来。成纤维细胞较大,轮廓清楚,多为突起的纺锤形或星形的扁平状结构,其细胞核呈规则的卵圆形,核仁大而明显。成纤维细胞功能活动旺盛,细胞质嗜弱碱性,具明显的蛋白质合成和分泌活动, |
收货处理取出T25细胞培养瓶,用75%酒精消毒瓶身,拆下封口膜,放入37℃、5%CO2,饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h,以稳定细胞状态
传代密度细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养
传代代数可传5代左右;3代以内状态最佳
传代比例传代建议1:2传代,1:2传代就是335个T25瓶传23493个T25瓶或者23493个6cm皿。不是335个T25瓶传23493个10cm皿
传代方法
1.吸出T25细胞培养瓶中的培养基,用PBS清洗细胞一次;
2.添加0.25%消化液1mL至T25培养瓶中,轻微转动培养瓶至消化液覆盖整个培养瓶底后,吸出多余消化液,37℃温浴1-3min;倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后,再加入5ml培养基终止消化;
3.用吸管轻轻吹打混匀,按1:2比例接种T25培养瓶传代,然后补充新鲜的培养基至5mL,置于37℃、5%CO2、饱和湿度的细胞培养箱中静置培养;
4.待细胞贴壁后,培养观察;之后每2-3天换液一次新鲜的培养基。
1.准备:取各种已消毒的培养用品置于净化台面,紫外线消毒20分钟。开始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。
2.布局:点燃酒精灯,安装吸管帽。
3.处理组织:把组织块置于烧杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如怀疑组织可能污染,可先置于含有青的混合液中30~60分钟。
4.剪切:用眼科剪把组织切成2~3毫米大小的块,以便于消化。加入比组织块总量多30~50倍的液,然后一并倒入三角烧瓶中,结扎瓶口或塞以胶塞。
5.消化:或用恒温水浴,或置于37℃温箱消化均可,消化中每隔20分钟应摇动一次,如用电磁恒温搅拌器消化更好。消化时间依组织块的大小和组织的硬度而定。
6.分离:在消化过程中见消化液发混浊时,可用吸管吸出少许消化液在镜下观察,如组织已分散成细胞团或单个细胞,立即终止消化,随即通过适宜不锈钢筛,滤掉尚未充分消化开的组织块。低速(500~1000转/分)离心消化液5分钟,吸出上清,加入适量含有血清的培养液。
7.计数:用计数板计数,如细胞悬液细胞密度过大,再补加培养液调整后,分装入培养瓶中。对大多数细胞来说,pH要求在7.2~7.4范围,培养液呈微红色,如颜色偏黄,说明液体变酸,可用NaHCO3调整。
8.培养:置于36.5℃温箱培养,如用CO2温箱培养,瓶盖需拧松半圈。
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