原代细胞的分离培养：

原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是的工具。常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。

（一）组织块培养法

许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞也较容易生长。尤其是培养心肌，有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后， 即可进行传代。

1. 设备材料

培养箱、冰箱、超净工作台／无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。

2. 操作步骤

（1） 在无菌条件下，取待培养的组织适量，置入小烧杯中， 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉组织块表面的血污。

（2）用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。

（3）再用Hanks 溶液反复漂洗， 直至液体不混浊为止。等组织块下沉，将烧杯倾斜，用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。

（4）用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培养液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培养液。

（5）用弯头吸管吸取组织小块，均匀地置于培养皿内表面，吸去多余的培养液，各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖，做好标记， 置37°C 的CO2培养箱内。

（6） 2~4h 后，于超净工作台中，缓缓地向培养皿中加入上述含20％血清及双抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培养液少量，以使组织块浸没在培养液中。

（7）轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱， 如无特殊情况，不必观察。1~2 周后，可观察到细胞从组织块边缘长出，形成生长晕。

（9） 一般说来，若培养液无明显改变， 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面，即可进行传代培养。

小鼠脑动脉血管平滑肌细胞

细胞基本属性：

质量检测：细胞经α-SMA免疫荧光鉴定，纯度可达90%以上，支原体、细菌、酵母和真菌检测为阴性

产品规格：5x105cells/T25或1mL冻存管

培养基：小鼠脑动脉血管平滑肌细胞培养基

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

换液频率：每2-3天换液一次

消化液：0.25%

产品货期现货，1周左右

运输方式T25培养瓶/ 顺丰快递（包邮）

供应限制仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

背景介绍：

公司正在出售的产品：

锌指蛋白Y染色体2抗体

组织半-9（CASPASE-9）活性荧光定量检测试剂盒

40%ACRYLAMIDE-BIS（37.5:1）溶液

线虫二环氧丁烷（diepoxybutane）诱导突变试剂盒

载玻片细胞HISTONE H3蛋白表达荧光显微镜检测试剂盒

动物源性食品山羊源基因检测试剂盒

GILLS苏木素复染试剂盒

细胞溶酶体型酸性磷酸酶总活性比色法定量检测试剂盒

酵母/真菌超氧化物歧化酶（SOD）亚型制备试剂盒

冰冻切片神经纤维银染试剂盒

磷脂酰肌醇PI（phosphatidylinositol）高效液相色谱法定量检测试剂盒

αSMA蛋白表达ELISA定量检测试剂盒

饮料比色法定量检测试剂盒

载玻片细胞βRUNX3蛋白表达NBT显色光学显微镜检测试剂盒

细胞/组织蛋白（基质金属）样品制备试剂盒

线粒体内膜功能/膜电位红色荧光（TMRE）测定试剂盒

粘膜细胞粘附分子1抗体

肝癌蛋白剪接变异体蛋白抗体

醛缩酶A抗体

Kelch样蛋白8抗体

细胞角蛋白2抗体

α1微球蛋白单克隆抗体

辣根过氧化物酶标记的神经丝蛋白单克隆抗体

小鼠脑动脉血管平滑肌细胞ATP结合转运因子2抗体

操作方法：

组织块直接培养法（原代细胞培养实验）

材料与仪器

【动物】选择大约一半足孕时间的胚胎，10－13天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。每组小鼠胚胎9364个【实验材料】每组的超净台中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml灭菌烧杯584个；3、50ml离心筒584个4、灭菌培养皿9364个，细胞培养瓶9364个5、1ml，200μl移液器各1支；枪头盒584个；无菌玻璃搅拌棒9364个6、细胞计数板1块；7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；8、酒精灯1台；

步骤

1) 胚胎的分离。适用哺乳动物(仓鼠、小鼠和大鼠)2)将1－584个胚胎转移至一个小的无菌培养皿中，用新的无菌剪刀小心地绞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在无菌状态下，将绞碎的胚胎转移于一50ml的无菌离心筒中,加入40ml 0.25％的无菌,用搅拌棒轻轻搅动。4)在温暖的环境中或置于37°C培养箱中轻轻摇动15分钟。5)让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降，将含有悬浮细胞的液体转移至一无菌50ml的离心管中，该管内按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以灭活,。6)加人新鲜溶液(见前述步骤)于含有残留未消化组织块的原来的50ml离心筒中，重复步骤4和5。7)离心混合的细胞悬液，1200r/rain，5分钟，弃上清。8)用新鲜的无菌PBS重悬沉淀的细胞，按步骤7再次离心。9)用PBS反复洗涤细胞直至上清清亮为止。