原代细胞的分离培养：

原代培养即直接从有机体取下细胞、组织或器官，让它们在体外维持与生长。原代培养的特点是细胞或组织刚离开机体，它们的生物性状尚未发生很大的改变，在一定程度上可反映它们在体内的状态，表现出来源组织或细胞的特性， 因此用于药物实验，尤其是药物对细胞活动、结构、代谢、有无毒性或杀伤作用等，是的工具。常用的原代培养法有组织块培养法和消化培养法。

（一）组织块培养法

许多实验室喜欢用组织块培养法进行原代培养，因为方法简单，细胞也较容易生长。尤其是培养心肌，有时还可观察到心肌组织块搏动。细胞从组织块边缘向外长出并铺满培养皿或培养瓶后， 即可进行传代。

1. 设备材料

培养箱、冰箱、超净工作台／无菌间、无菌吸管、离心管、酒精灯、试管架、培养瓶、培养皿、消化液、基础培养液、胎牛血清、Hanks 溶液、双抗试液、剪刀、摄子、小烧杯。

2. 操作步骤

（1） 在无菌条件下，取待培养的组织适量，置入小烧杯中， 以适量Hanks 溶液清洗2~3 次，去掉组织块表面的血污。

（2）用眼科剪将组织块反复剪成0.5~ 1mm3的小块。

（3）再用Hanks 溶液反复漂洗， 直至液体不混浊为止。等组织块下沉，将烧杯倾斜，用小吸管尽量吸除Hanks 溶液。

（4）用含20%灭活血清及双抗溶液(200U/ml、200μg/ml）的培养液再清洗，用吸管吸干后加入5ml 含20％血清的培养液。

（5）用弯头吸管吸取组织小块，均匀地置于培养皿内表面，吸去多余的培养液，各组织小块之间相距0.5cm 为宜。盖好培养皿盖，做好标记， 置37°C 的CO2培养箱内。

（6） 2~4h 后，于超净工作台中，缓缓地向培养皿中加入上述含20％血清及双抗溶液( 100U/ml 及100μg/ml ）的培养液少量，以使组织块浸没在培养液中。

（7）轻轻地将培养皿及组织块移至CO2 培养箱， 如无特殊情况，不必观察。1~2 周后，可观察到细胞从组织块边缘长出，形成生长晕。

（9） 一般说来，若培养液无明显改变， 1 周换液1 次即可。待细胞长满整个培养皿内表面，即可进行传代培养。

兔脉络膜微血管内皮细胞

细胞基本属性：

质量检测：CD34、CD31免疫荧光染色为阳性，纯度高于 90%，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等

产品规格：5x105cells/T25或1mL冻存管

培养基：兔脉络膜微血管内皮细胞培养基

培养条件：气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

换液频率：每2-3天换液一次

消化液：0.25%

产品货期现货，1周左右

运输方式T25培养瓶/ 顺丰快递（包邮）

供应限制仅限于科学研究，绝不可作为动物或人类疾病的治疗产品使用

背景介绍：

公司正在出售的产品：

小鼠白介素1(IL-1)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Human advanced glycation end product receptor (RAGE/AGER) ELISA Kit 人晚期糖基化终末产物受体(RAGE/AGER)ELISA试剂盒

HumanN-MIDOsteocalcin,N-MID-OTELISAKit 人N端中段骨钙素(N-MID-OT)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

HumanCaspase-9,Casp-9ELISA试剂盒人胱天蛋白酶9(Casp-9)ELISA试剂盒规格：96T/48T

转基因油菜(canola)HCN28品系试剂盒20次

humansimilaoRIKENcDNA3110050K21geneELISAKit人类似RIKENcDNA3110050K21基因ELISA试剂盒规格：96T/48T

猪肝细胞生长因子(HGF)ELISA 试剂盒 96T/48T 试剂盒 组装/原装

Human Ureaplasma urealyticum aibody (UU-Ab) ELISA Kit 人解脲脲原体抗体(UU-Ab)ELISA试剂盒

PorcineEndothelialniicoxidesyhase3,eNOS-3ELISAKit 猪内皮型合成酶3(eNOS-3)ELISA试剂盒 96T/48T 进口分装

CLIAKitforAlpha-bungarotoxin,Alpha-BGTELISAKitα-银环蛇毒素规格：48T/96T

血液赖辅酶(lysine)含量化学比色法定量检测试剂盒20次

NudeMouseProteinPhosphatase,PPELISAKit裸鼠蛋酸酶(PP)ELISA试剂盒规格：96T/48T

兔脉络膜微血管内皮细胞猪白介素8(IL-8/CXCL8)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

猪白介素6(IL-6)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

猪白介素4(IL-4)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

猪白介素3(IL-3)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

操作方法：

组织块直接培养法（原代细胞培养实验）

材料与仪器

【动物】选择大约一半足孕时间的胚胎，10－13天龄胚胎含有最大数量的未分化的间质细胞，成纤维细胞可从这些细胞衍生获得。每组小鼠胚胎415个【实验材料】每组的超净台中有以下物品：1.50ml配制好的RPMI1640培养液1瓶；8ml小牛血清（FCS)1瓶；100ml 0.25%瓶；PBS(-)1瓶2.100ml灭菌烧杯0958个；3、50ml离心筒0958个4、灭菌培养皿415个，细胞培养瓶415个5、1ml，200μl移液器各1支；枪头盒0958个；无菌玻璃搅拌棒415个6、细胞计数板1块；7、灭好菌的镊子1把，剪刀1把；8、酒精灯1台；

步骤

1) 胚胎的分离。适用哺乳动物(仓鼠、小鼠和大鼠)2)将1－0958个胚胎转移至一个小的无菌培养皿中，用新的无菌剪刀小心地绞碎胚胎，用PBS漂洗。3)在无菌状态下，将绞碎的胚胎转移于一50ml的无菌离心筒中,加入40ml 0.25％的无菌,用搅拌棒轻轻搅动。4)在温暖的环境中或置于37°C培养箱中轻轻摇动15分钟。5)让存留的组织块在重力作用下慢慢沉降，将含有悬浮细胞的液体转移至一无菌50ml的离心管中，该管内按照每10ml上清加入l ml小牛血清的比例加入牛血清以灭活,。6)加人新鲜溶液(见前述步骤)于含有残留未消化组织块的原来的50ml离心筒中，重复步骤4和5。7)离心混合的细胞悬液，1200r/rain，5分钟，弃上清。8)用新鲜的无菌PBS重悬沉淀的细胞，按步骤7再次离心。9)用PBS反复洗涤细胞直至上清清亮为止。