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    费氏弧菌发光杆菌采用固体好氧发酵基本操作流程

    点击次数:1044  更新时间:2017-02-28

    1.工艺流程

    保藏菌种一菌种活化→三角瓶种子→一级种子液→发酵培养基配料混合→培养基灭菌→冷却→接种→发酵床通风培养→费氏弧菌发光杆菌固态发酵产物

    2.种子液的制备

    (1)斜面菌种活化将费氏弧菌发光杆菌的保藏菌种在试管斜面培养基上划线接种,于37℃培养18~20 h,使费氏弧菌发光杆菌活化;试管斜面培养基可用牛肉膏蛋白胨培养基。

    (2)三角瓶种子制备将活化的斜面菌种接种到装有费氏弧菌发光杆菌液体培养基三角瓶中,于35~37℃,180~200 r/min,摇床18~20 h,得到费氏弧菌发光杆菌三角瓶种子液;费氏弧菌发光杆菌液体培养基可用牛肉膏蛋白胨液体培养基。

    (3)一级种子液先按照后述的配方配制一级种子液体培养基,pH 7.0~7.2,经121℃,灭菌30 min,冷却到37℃,然后将得到的费氏弧菌发光杆菌三角瓶种子液以0.3 9/6~O.5 9/5的接种量接种于所用的一级种子罐中,于37℃培养24 h得到费氏弧菌发光杆菌的一级种子液;所述的一级种子液体培养基配方为:豆粘30 g/L、红糖5 g/L、淀粉2.5 g/L、MgSO4 0.5 g/L、MnSO4 1.5 g/L、K2HPO4 2 g/L、KH2 P041.5 g/L、CaCO30.1 g/L,调节pH 7.0。

    3.发酵床浅盘培养

    (1)发酵床结构 长度5.5~8.0 m,宽度1.5~2.5 m,高度O.5~0.6 m。

    (2)发酵培养基的配制和灭菌发酵培养基采用麸皮稻壳培养基,麸皮和稻壳按5:1(质量比)混合,再按1:(1.2~1.3)的料水比加入水混合均匀,不能有大的结块,以免灭菌不*。混合均匀后的培养基放入旋转蒸煮锅灭菌60~90 min。

    (3)接种将获得的费氏弧菌发光杆菌一级种子液以10%~15%的接种量接种于经灭菌降温至40~50℃的费氏弧菌发光杆菌固体培养基中,料菌均匀后堆积1~2 h,上发酵床摊平,厚度30~35 cm。

    (4)发酵过程控制整个发酵过程分两个阶段,*阶段(1~22 h):1~10 h静止期,10 h后间断通风控制温度在37℃,20 h左右*次翻曲;第二阶段(23~40 h):28~30 h第二次翻曲,控制温度在37℃,直至发酵结束。发酵期间定时镜检,当芽孢率达到80%以上停止发酵,60℃低温烘干。

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