1.原液制备：
菌液的制备：将合格的伤寒杆菌H菌株接种于普通琼脂的克氏瓶或大试管内37℃孵育18—24小时。肉眼观察有无杂菌生长，必要时作镜检。用无菌甲醛生理盐水洗下菌苔，将洗下液体装入无菌试管内，置37℃恒温箱18—24小时以杀菌。得到原液。用作无菌试验即将菌液接种于肉汤及琼脂培养基培养4天，无活菌生长者才可使用。
菌液的制备：将合格的伤寒杆菌菌株依上法培养后，用无菌0.5%石灰酸盐水将菌苔洗下，洗液装入无菌试管置于37℃温箱中18—24小时杀菌得原液。经检查无菌时可以使用(如无伤寒杆菌菌株也可用菌株制备抗原。即用0.5%石灰酸生理盐水洗下菌液置100℃水浴60分钟，破坏其H抗原即为O菌液。
2.应用液的制备：
合格的原液用标准比浊管计算含菌落数目后，用生理盐水稀释至每毫升含菌10亿。是为了应用液加入适量甲醛使其为0.25%，制备好的原液及应用液均保存在2—10℃冰箱中备用，有效期为1年。
菌液浓度的计算及稀释法：
菌液的浓度可用标准比浊法来测定，方法如下：
(1)分别配制1%硫酸溶液及1%氯化钡溶液
(2)取口径相等质地相同的试管10支，依下表所示分别将硫酸及氯化钡溶液加入，封固管口，注明号码备用。
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