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    人血吸虫抗体(IgM)ELISA试剂盒​操作步骤

    点击次数:886  更新时间:2021-11-16

    操作步骤:


    1. 标准品的稀释与加样:在酶标包被板上设标准品孔10孔,在di一、第二孔中分别加标准品100μl,然后在di一、第二孔中加标准品稀释液50μl,混匀;然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl,混匀;然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉,再各取50μl分别加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul,混匀;混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl,混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl,浓度分别为180 ng/L,120 ng/L ,60 ng/L,30 ng/,15 ng/L)。

    2. 加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

    3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。

    4. 配液:将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。

    5. 洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

    6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。

    7. 温育:操作同3。

    8. 洗涤:操作同5。

    9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟.

    10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

    11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟。

    HUVEC-12, 人脐静脉血管内皮细胞系

    HUM, 正常人主动脉平滑肌细胞

    HAVSMC, 人主动脉平滑肌细胞

    LX-2, 人肝星形细胞株

    3T3-L1, 小鼠前脂肪细胞

    C2C12, 小鼠肌原细胞

     细胞名称

    MCF-7(MCF7)(ATCC来源), 人乳腺癌细胞

    MDA-MB-231(ATCC来源), 人乳腺癌细胞

    Raji,人Burkitt's淋巴瘤细胞

    Saos-2,人成骨肉瘤细胞

    Caco-2,人结直肠腺癌细胞

    NCI-N87 [N87]人胃癌细胞

    MGC80-3(MGC-803)人胃癌细胞

    EC109,人食管癌细胞

    HGC-014191人胃癌细胞

    AGS人胃腺癌细胞

    U0069人胶质瘤细胞

    THP-191人单核白血病细胞

    HuH-026人肝癌细胞

    SK-MEL-1, 人皮肤黑色素瘤细胞

    A549, 人肺癌细胞系

    SKOV3/Taxol-25, 人卵巢癌紫杉醇耐药细胞株

    A-375 [A375], 人恶性黑素瘤细胞株

    A549/DDP, 人肺腺癌耐药细胞株

    SP2/0, 小鼠骨髓瘤细胞

    WM35, 人黑色素瘤细胞

    BxPC-3, 人原位胰腺腺癌细胞株

    U-2 OS, 人骨肉瘤细胞

    WM451, 人黑色素瘤细胞

    SW 1990 [SW-1990, SW1990] , 人胰腺癌细胞


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