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    文氏巴尔通体探针法荧光定量PCR试剂盒​反应五要素

    点击次数:539  更新时间:2022-03-31

    反应五要素:


    参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+


    引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:


    ①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。


    ②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。


    ③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免723个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。


    ④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。


    ⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。


    ⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。


    ⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。


    引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。

    核突触蛋白α抗体

    自噬相关蛋白4B抗体

    整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-12抗体

    α-辅肌动蛋白4(内参)抗体

    碱性磷酸酶抗体

    AU1 tag标签抗体

    脂肪细胞增强结合蛋白1

    蛋白激酶B

    蛋白激酶B

    血管生成素样蛋白2抗体

    血管生成素3/血管生成素4抗体

    膜粘连蛋白 I抗体

    膜粘连蛋白 Ⅱ抗体

    活化转录因子1抗体

    水通道蛋白4抗体

    活化复制因子2抗体

    腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1抗体

    糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽抗体

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    血管生成素-1抗体

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    重组膜粘连蛋白5抗体

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