反应五要素:
参加PCR反应的物质主要有五种即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特异性反应的关键,PCR 产物的特异性取决于引物与模板DNA互补的程度。理论上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物,利用PCR就可将模板DNA在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则:
①引物长度: 15-30bp,常用为20bp左右。
②引物扩增跨度: 以200-500bp为宜,特定条件下可扩增长至10kb的片段。
③引物碱基:G+C含量以40-60%为宜,G+C太少扩增效果不佳,G+C过多易出现非特异条带。ATGC*随机分布,避免723个以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物内部出现二级结构,避免两条引物间互补,特别是3'端的互补,否则会形成引物二聚体,产生非特异的扩增条带。
⑤引物3'端的碱基,特别是最末及倒数第二个碱基,应严格要求配对,以避免因末端碱基不配对而导致PCR失败。
⑥引物中有或能加上合适的酶切位点, 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点, 这对酶切分析或分子克隆很有好处。
⑦引物的特异性:引物应与核酸序列数据库的其它序列无明显同源性。
引物量:每条引物的浓度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量产生所需要的结果为好,引物浓度偏高会引起错配和非特异性扩增,且可增加引物之间形成二聚体的机会。
核突触蛋白α抗体
自噬相关蛋白4B抗体
整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-12抗体
α-辅肌动蛋白4(内参)抗体
碱性磷酸酶抗体
AU1 tag标签抗体
脂肪细胞增强结合蛋白1
蛋白激酶B
蛋白激酶B
血管生成素样蛋白2抗体
血管生成素3/血管生成素4抗体
膜粘连蛋白 I抗体
膜粘连蛋白 Ⅱ抗体
活化转录因子1抗体
水通道蛋白4抗体
活化复制因子2抗体
腺苷单磷酸活化蛋白激酶β1抗体
糖尿病相关肽/胰岛淀粉样肽抗体
血管紧张素Ⅱ抗体
血管紧张素Ⅱ受体1抗体
血管生成素-1抗体
膜粘连蛋白5抗体
重组膜粘连蛋白5抗体
衔接蛋白α-Adaptin抗体
凋亡蛋白活性因子-1抗体(C端)
凋亡蛋白活性因子-1抗体(N端)
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