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    感觉态细胞的储存和制备注意事项

    点击次数:4224  更新时间:2023-01-26
       感觉态细胞的储存:
      每次转化时使用新鲜的细胞是明智的,因为长时间储存,转化效率会降低,但这并不总是可行的。
     
      感受态细胞可以存储在-80°C长达一年,没有转化潜能的损失。然而,瞬间冻结在液氮或-80°C冰箱是不建议的。需要在冷冻保护剂中,像哺乳动物细胞一样缓慢地冷冻。
     
      使用硬纸板或聚苯乙烯泡沫塑料盒等储存。
     
      用纸片等将盒子里的细胞管隔开,分成多个小格子。
     
      复苏过程中,在37°C解冻细胞,转化前用丰富培养基清洗防冻剂。
     
      感觉态细胞的制备注意事项:
      1、配制溶液的水受有机污染,会降低感受态的转化率;
     
      2、液氮速冻可以提高转化效率约5倍;
     
      3、甘油会使细菌沉淀附着力降低;
     
      4、感受态细胞是很脆弱的,实验操作过程中,动作要轻;
     
      5、制备感受态,所用的试剂及器具的洁净程度要求高;操作要求严格;转化效率高;
     
      6、为达到高转化效率,活细胞数需少于16个细胞/ml;
     
      7、不同菌株之间,OD600的数值与每毫升中活细胞数间的关系很大;
     
      8、在大肠杆菌生长曲线上,在生长初期和末期两个时期获得较高转化率;
     
      9、有实验曾表明,可以在4℃在氯化钙溶液中保存24-48h,在起初保存的12-24h内,转化效率会有所提高,然后降低到初始水平;
     
      10、对于克隆用途来说,每份细胞体积有50μl足矣;
     
      11、玻璃管会降低转化率约10倍。
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