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    人血管平滑肌细胞的培养步骤和实验方法

    点击次数:1047  更新时间:2023-02-24
       人血管平滑肌细胞是构成血管壁组织结构及维持血管张力的主要细胞成分,其结构及功能。的改变可导致细小动脉硬化甚至高血压的发生发展。高血压病是一种以细胞增殖。为主要病变的疾病。高血压病时血管结构的改变主要表现在细胞肥大、增殖及结。缔组织含量增加,中小动脉壁肥厚。
     
      人血管平滑肌细胞的培养步骤:
      1)复苏细胞:将细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻,加入培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心5分钟,弃去上清液,补加培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜,培养过夜。第二天换液并检查细胞密度。
     
      2)细胞传代:如果细胞密度达80%-90%,即可进行传代培养。
     
      人血管平滑肌细胞的实验方法:
      1、分离与培养:麻醉后取胸主动脉及腹主动脉,将血管组织剪成小块培养于含有10%血清的DMEM低糖培养基中。待细胞生长至融合后采用胰酶消化传代,采用细胞进行实验。
     
      2、增殖实验:将细胞接种至96孔板,待细胞贴壁后换用无血清的DMEM低糖培养基饥饿24h。采用细胞计数试剂盒测定的吸光度值,以各组吸光度值与初始吸光度的比值作为各组的相对细胞活力,并以此绘制细胞增殖曲线。
     
      3、划痕实验:将细胞接种于12孔板,待细胞生长融合时换用无血清DMEM低糖培养基饥饿24h,采用无菌吸头划痕并采用PBS冲洗2次。换用条件培养基孵育24h,并拍照观察。每组随机取84个视野,计数迁移细胞的数目,以此判断细胞的迁移活性。
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