PRODUCTS
产品中心
  • ELISA试剂盒
  • 血清
  • 细胞
  • 质粒
  • 标准品
  • PCR基因检测试剂盒
  • 生化试剂
  • 生化检测试剂盒
  • 抗体
  • 细胞系
  • 原代细胞
  • 细胞培养基
  • 中药标准品
  • 技术文章/ARTICLES

    首页   >    技术文章   >   切片清洗(浸洗、冲洗和漂洗)

    切片清洗(浸洗、冲洗和漂洗)

    点击次数:1826  更新时间:2015-08-10

    抗体稀释液

        其实许多实验室稀释液就用一般PBS即可,但的抗体稀释液中除PBS成份外,还加了*防腐剂、BSA稳定剂等组份,对抗体的多次回收利用较好。正因为这种原因,我一直用国产的抗体稀释液,一段时间在更换新抗体稀释液时实验结果出现了阴性结果(提示可能一抗没有结合),zui后从抗体浓度和孵育时间、封闭时间等原因排除后,发现是新抗体稀释液的PH值偏酸,而使抗原抗体反应不佳,终而出现假阴性结果。

    切片清洗(浸洗、冲洗和漂洗)

        为了防止一抗、二抗等试剂残留而引起非特异性染色,所以适当地加强清洗(延长时间和增多次数)尤为重要,我一般在一抗孵育前的清洗是3min*3次,而一抗孵育后的清洗均为5次*5min。
    注意:

    ①单独冲洗,防止交叉反应造成污染。

    ②温柔冲洗,防止切片的脱落。我喜欢用浸洗方式;

    ③冲洗的时间要足够,才能*洗去结合的物质。

    ④PBS的PH和离子强度的使用和要求。这方面我有惨痛教训,当时我买的稀释液偏酸,结果背景一片黄(未见特异性染色),建议PH在7.4-7.6浓度是0.01M。(中性及弱碱性条件(PH7-8)有利于免疫复合物的形成,而酸性条件则有利于分解;低离子强度有利于免疫复合物的形成,而高离子强度则有利于分解)

    DAB显色

        背景的深浅和特异性染色的深浅均可以由DAB孵育条件决定。DAB显色时间不是固定的,主要由显微镜下控制显色时间,到出现特异性染色较强而本底着色较浅时即可冲洗;DAB显色时间很短(如几秒或几十秒)就出现很深的棕褐色,这很可能说明你的抗体浓度过高或抗体孵育时间过长,需要下调抗体浓度或缩短你的抗体孵育时间;此外,若很短时间就出现背景很深,还有可能你前面的封闭非特异性蛋白不全,需要延长封闭时间;DAB显色时间很长(如超过十几分钟)才出现阳性染色,一方面可能说明你的浓度过低或孵育时间过短(一抗4℃);另一方面就是封闭时间过长。

    关注我们:

    © 2024 上海一研生物科技有限公司版权所有  备案图标.png粤ICP备42437975号        技术支持:    GoogleSitemap