胶体金可用多种方法制备,其中应用较为广泛的是化学还原法。这一方法的基本原理是在氯化金水溶液中加入一定量的还原剂,使金离子还原为金原子,可用于制备胶体金的还原剂有50余种,但在生物医学领域内zui为常用的还原剂是白磷、柠檬酸三钠以及鞣酸等。
白磷还原法的建立已有近百年的历史,由于此法操作较为简便,制备出来的胶体金颗粒大小较一致,因而应用较为广泛,现以Faulk和Taylor(1971)的报道为基础介绍这一方法。
(1)取1%氯化金1.5mli、0.1mol/LK2CO3 1. 2ml,加入120ml双蒸水。
(2)上述溶液充分搅拌混匀3min以上。
(3)在搅拌条件下将1ml新鲜配制的20%饱和白磷溶液加入上述混合液中,约在5min内溶液变为棕红色。
(4)将上述混合液加热煮沸,直至变成鲜明的橙红色为止,一般约需10min。
橙红色的出现表明氯化金的还原反应终止,胶体金制备成功。按上述法制备的金颗粒直径为(5.6土0.9)nm。
白磷还原法一般只能制备出单一颗粒直径的胶体金。因此,用于电镜双重标记或多重标记时此法显得有些不足,还需结合其他方法。Henegouwen等(1986)发展了传统的白磷还原法,可制备出多种不同直径的胶体金,取得了良好的效果,具体方法如下。
(1)取0.5ml新鲜配制的20%饱和白磷溶液,加入到60ml用上述方法制备的胶体金中(5.6nm土0.9nm)充分振摇5rain以上。
(2)将1%氯化金0.75ml及0.1mol/LK2CO3 0.6ml加到上述溶液内,振摇数分钟溶液变成棕红色。
(3)将上液煮沸加热,直至变成鲜明的红色,一般需10min。
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