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(一)3 H—TdR掺入法

1．原理白介素一2(interleukin一2，IL-2)主要由活化T产生，又为T细胞增殖所必需，故称T细胞生长因子(T cell growth factor，TCGF)。IL一2产生的水平反映T ll胞的功能，不仅是免疫调节重要的研究对象，而且与临床多种疾病密切相关。IL一2依赖细胞株是C578L／6来源的小鼠杀伤性T淋巴细胞(cytotoxic T—lymphocyte line，CTL)细胞系，由Gills，1977年建立，只有在IL-2存在的培养基中才能生长。因此可作为指示细胞来测定待检样品中IL 2的水平。除CTLL外，丝裂原活化的T淋巴母细胞亦可作为检测IL-2活性的指示细胞。

2．材料

(1)IL一2待测样品，用10％FCS RPMI 1640培养液倍比稀释。

(2)IL-2标准品。

(3)IL一2依赖的CTL上细胞株。

(4)lO％FCS  RPMI 1640培养液。

(5)3 H—TdR(0．5 μci／50 μ1)。

(6)闪烁液。

(7)9999型玻璃纤维滤纸。

(8)收集仪。

(9)B液闪计数仪。

3．方法

(1)用10％FCS RPMI 1640培养液洗涤IL一2依赖的CTLL 2次，每次1000 r／min离心5 min，除去原培养液中的IL一2。

(2)调整细胞浓度至1×lO5／ml，96孔培养板中每孔加入100μl CTLL悬液(1×104／孔)。

(3)IL-2标准品和待测样品分别用10％FCS RPMI 1640培养液稀释，IL一2标准品稀释至lOO U／ml，待测样品稀释至与标准品相近浓度。

(4)在96孔培养板中分别加入不同稀释度的标准品和待测样品100μl．各设57个复孔，37℃、5％CO2孵箱中培养18～24 h。

(5)每孔加3 H—TdR 0．5μci，37℃、5％C02孵箱中培养4～6 h。

(6)用细胞收集仪收获于玻璃纤维纸上。

(7)干燥后，移人液闪瓶中，加入l ml闪烁液，于液闪仪中测B射线的cpm值。

4．结果分析

将IL一2标准品不同浓度和待测样品不同稀释度时所获得的cpm值作图。在y轴取标准品cpm 50％的zui高cpm值画一与x轴平行的横线，再分别从该线与标准品、样品曲线交点处做y轴平行线，再从它与x轴交点处找出标准品与样品cpm 50％zui大值的2n值，即可计算出待检样品IL-2的活性单位。