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    羊水细胞(amniotic cell)是羊水中胎儿脱落的总称，可分为上皮样细胞、成纤维细胞样细胞、羊水样细胞。羊水细胞主要用于胎儿染色体疾病和先天性代谢疾病的产前诊断。

一、材料与试剂

1．培养液 PRMI 1640、HamF10、HamF、12等培养液均可。一般添加20%胎牛血清或30％小牛血清，谷氨酰胺1mmol／L，青霉素50U／ml，链霉素50μg／ml。

2．分层液 比重为1．077g／ml的Ficoll一Urografin溶液。

3．清洗液1：1混合的培养基与胎牛血清。

4．消化液0．25％胰酶一0．1％EDTA混合消化液。

二、操作方法

(一)取材

1．采用羊膜腔穿刺术，妊娠12～30周的羊水细胞均可培养成功。一般在孕16～20周时，子宫已超出盆腔，易穿刺取得羊水而且羊水中活细胞比例高，是羊膜腔穿刺行羊水细胞培养的*时期。

2．B超定位后，常规消毒，采用22号PIE穿刺针，经腹壁行羊膜穿刺术抽取羊水。zui初抽取约2ml羊水弃去，更换注射器后继续抽取羊水约15～40ml。留2ml羊水用于计数细胞(活细胞及血细胞计数)。其余羊水注入离心管中，备用。

(二)羊水细胞的富集

1．将注入离心管的羊水，以800r／min离心10min，弃上清液。

2．加入5ml培养液，用吸管轻轻吹打沉淀，制成细胞悬液。

3．将4ml分层液加入一个新的离心管中，再将细胞悬液轻铺于分层液表面，形成清晰液面。

4．经450r／min离心20min后，离心管中液体分三层，收集第三层，弃上面两层液体和细胞沉淀。

5．向收集到的细胞悬液中加清洗液清洗，1500r／min。离心7min，弃上清液。重复清洗1次。

6．用培养液重悬细胞，检测活细胞数。

(三)培养方法

1．以1×7493个／m1的活细胞密度接种，置37℃、5％CO2培养箱中培养。

2．培养5d后，若观察到有较好的梭形细胞克隆则更换新鲜培养液。以后每隔2d换一次液。

3．当培养瓶中长出几个孤立的细胞克隆时，弃培养液，用PBS洗，再加少量O．25％胰酶一O．1％EDTA消化液，消化5～10min。

4．加入培养液终止消化反应，用吸管吹打细胞使之集落分散。

5．分散的细胞仍可保留在原培养瓶，加入培养液，继续培养。待细胞贴壁后即可换液。以后每2d换液一次，并逐日观察细胞生长状态。

三、注意事项

1．在准备接种用的细胞悬液时，保留一定量的羊水，以保持体内生长条件，利于羊水细胞的培养。

2．在体外培养时，羊水细胞不易贴壁，所以在培养的前几天要静置培养。

3．*次换液时，如果生长状态良好，可以全量换液；若细胞状态不好，半量换液为宜。