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    微小残留病(minimal residual disease，MRD)一般是指白血病患者在经过治疗后体内残存白血病的状态，被认为是白血病复发及影响预后的主要原因。广义而言，此含义还可包括其他恶性肿瘤。MRD被认为是在传统检测方法所能检测到的肿瘤细胞水平以下的长期存在的肿瘤细胞，这些肿瘤细胞一旦增殖到一定程度能引起复发。因此，有效利用MRD检测能够很好地指导治疗以增加*，提高疗效，特别是对HSCT的疗效评估方面也有重要的意义。

 MRD的检测方法

    MRD的检测方法很多，主要有细胞形态学、细胞遗传学、FISH、流式细胞仪和PCR等方法。各种检测MRD方法应用情况及其优缺点的比较。

1.形态学方法

    常用方法包括骨髓穿刺和骨髓活检。常规骨髓穿刺涂片检查法对临床白血病的诊断、疗效观察、复发判断仍具有很重要的作用，但形态学上尚不能真正区分正常细胞与白血病细胞，只是依据原始细胞百分比进行判断。即使在实体瘤患者中，通过组织细胞学检测仍不能敏感地反映肿瘤细胞的存在情况。而孤立的肿瘤细胞极易进入静止期而不易被检测到。实体瘤或急性白血病患者的类似孤立的细胞可通过多部位采集涂片检查而增加阳性检出率，但zui终还需要更敏感、更客观的检测手段来证实。

    白血病*缓解后骨髓活检检查 MRD预测判断复发要比穿刺涂片更敏感些，尤其是切片上发现呈斑点状的原始细胞，应高度怀疑白血病复发的可能。总之，骨髓形态学方法对于检查MRD一般来说不够敏感，只有当体内白血病细胞>109时才有意义。但是细胞形态学方法仍为判断白血病状态的重要方法。

2.体外荧光原位杂交技术

    对于血液肿瘤中非随机的细胞遗传学的认识，促进了对疾病病原学的认识。新的异常染色体的发现有利于促进白血病的分类，特别是某些染色体的异常可作为判断预后的重要指标。

    传统的细胞遗传学分析的敏感性受处于分裂中期的染色体的数量所限制，而且很少应用于MRD的研究上。与白血病相关的遗传学改变可预测复发，而无类似的改变也不能排除复发。因此，传统的细胞遗传学的分析耗时、费力，且对检测者水平要求比较高。

    FISH是一种较传统细胞遗传学更为特异、敏感、方便的方法。它是指在细胞内用荧光标记的DNA探针与染色体杂交，它可用分裂期的细胞作为研究对象，包括中期FISH和间期FISH，二者均可用于分析异常染色体的数量和结构，而间期FISH不需要培养细胞，可同时进行免疫分型和基因分型，更多地应用于分析具有细胞遗传学异常的细胞的比例。

    FISH可应用于以下情况:①获取或丢失整条染色体或肿瘤特异染色体区域;②检测单基因的缺失和重排;③定义一些用传统细胞遗传学方法无法明确的染色体异位;④揭示一些特殊的、异常的复杂核型;⑤评估致癌基因或肿瘤超基因的拷贝数;⑥监测患者的临床过程，如性别不合的HSCT。

3.流式细胞仪

    流式细胞仪(flow cytometer，FCM)是一种对处在液流中的细胞或其他生物微粒逐个进行多参数的快速定量分析和分选的技术。FCM可同时分析多种细胞参数(如细胞形态、活力和免疫表型)，还能用荧光位点杂交来进行 MRD的研究。因此，流式细胞仪作为当前的研究MRD的仪器，是因为它能同时区分多荧光染料，从而使MRD检测更加方便和更为有效。

    FCM对MRD检测的敏感性取决于所要检测的细胞数量及目标细胞与非目标细胞在形态上和表型上的区别程度。在理想条件下，大于1/694个细胞的目标细胞可用流式细胞仪检测到，而1/106的目标细胞能清楚地被检测到。当 MRD被用于临床时，不同标记的目标的数量较低，10～2959个集落细胞可用于解释流式的信号，从而使MRD的敏感性增加到1/104。

4.聚合酶链反应

    聚合酶链反应(polymerase chain eraction，PCR)是一种在体外扩增DNA片段的重要技术。当存在模板DNA、底物、上下游引物和耐热的DNA聚合酶时，经过多次“变性—复性—延伸反应”的循环过程;痕量模板DNA可扩增至几百万倍。因此用PCR进行MRD检测是极为合适的，并使 MRD的检测方法有了突破性的进展。现有的PCR方法包括RNA-PCR、反向PCR、引物标记PCR、实时PCR(RT-PCR)和实时定量PCR(RQ-PCR)。

    PCR方法扩增的肿瘤特异核苷酸序列包括染色体易位的断裂点结合区、患者特异的抗原受体基因重排序列和异常表达的基因。PCR检测MRD的敏感度已达到1/107～1/106，使MRD的检出率大大提高，这种方法是目前临床研究 MRD的主要手段之一。PCRzui大的限制是污染影响了其敏感性。预防污染发生就要防止由于污染而导致的假阳性，特别是由于一些特殊扩增物质延续而产生的结果。