PCR检测试剂盒利用离心柱内硅基质膜提取猪伪狂犬病毒DNA,以此为模板,在特异引物和TaqDNA聚合酶的作用下,经高温变性,低温退火、中温延伸的循环,使特异的DNA片段拷贝数放大一倍。经过30次循环,使扩增的DNA片段放大数百万倍。将扩增的DNA片段进行电泳,经染色后在紫外灯照射下,肉眼可见DNA片段的扩增带,进而判断待检样本中是否含有猪伪狂犬病毒。
PCR检测试剂盒具有下列特点:
1.根据 DHBV 的保守序列设计的专一性引物,与相关病毒无交叉反应。
2.灵敏度比常规PCR 高 2-3 个数量级,可以达到几百拷贝/反应。
3.即开即用,用户只需要提供样品模板,操作简单,定量准确快速。
4.一管式荧光定量 PCR 检测,避免后续污染。
5.足够 50 次 20μL 反应体系的荧光定量 PCR。
PCR检测试剂盒的注意事项:
1.反应体系应在特定配液区或者超净工作台中配制,整个实验过程严格控制污染。
2.PCR整个试验分配液区、模板提取区、扩增区。流程顺序为配液区→模板提取区→扩增区。严禁器材和试剂倒流。
3.使用不含荧光物质的一次性手套,一次性离心管。
4.反复冻融试剂将减低检测灵敏度,本试剂盒应在5次内用完.
5.-20℃保存的各试剂管使用前应在室温下*融化,液体融化后需*混匀,2000 rpm离心15 s ,使用后立即放回-20 ℃。
6.在RNA提取过程中,避免RNA酶污染,尽量缩短操作时间。
7.注意防止试剂盒组分受污染。不要使用超过有效期限的试剂,试剂盒之间的成分不要混用。
8.PCR反应管避免气泡存在,管盖需盖紧。
9.不同批次的试剂盒勿混用。